一、细胞基本属性
- 细胞名称：鸭脑微血管内皮细胞（Duck Brain Microvascular Endothelial Cells）
- 细胞别称：DBMEC；脑微血管内皮细胞；脑血管内皮细胞
- 种属来源：鸭（Anas platyrhynchos）
- 年龄性别：健康成鸭（性别不限，供体筛选无神经系统疾病史）
- 组织来源：脑组织微血管段
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：单层铺路石样排列，接触抑制后呈不规则多角形
- 细胞代数：P3 - P8（经功能验证确保代谢活性稳定）
- 细胞规格：5×10⁴ cells/T25培养瓶或0.5mL冻存管（含专用冻存液）
- 培养基：Avian Endothelial Medium（含1% FBS+禽类内皮细胞生长因子）
- 培养条件：气相：5% CO₂+95%空气；温度：39℃（禽类最适温度）；湿度：95%
- 冻存条件：禽类专用无血清冻存液（含8% DMSO及海藻糖保护剂），-150℃液氮长期保存
- 倍增时间：约60 - 96小时（与血管区域特异性相关）
- 供应限制：仅限基础科研使用，不可用于疫苗开发或跨物种实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：39℃水浴振荡解冻，加入3mL预温培养基轻柔混悬
- 培养瓶：酒精喷洒外壁消毒，静置30分钟后移入培养箱
- 传代标准：细胞融合度达80% - 85%（建议每4 - 5天传代）
- 传代比例：1:2至1:3（初始接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法
- 使用0.02%胰酶-EDTA溶液（含0.1%胶原酶）
- 39℃消化3 - 5分钟，边缘细胞卷曲时即刻终止
- 注意事项
- 禁止机械刮除法（易损伤胞间紧密连接）
- 首次传代后需静置12小时再更换培养基
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：禽类专用冻存液（含8% DMSO+10%胎牛血清）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤
- 离心后重悬细胞至冻存液，分装于内旋盖冻存管
- 程序降温：4℃ 1h → -20℃ 4h → -80℃ 24h → 液氮储存
- 复苏验证
- 台盼蓝染色存活率≥85%（复苏后12小时检测）
- 功能验证：Ⅷ因子免疫荧光染色（P5代阳性率＞90%）
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 物流全程超温记录（需提供温度记录仪数据）
- 5日内证实真菌污染（需提供革兰氏染色证据）
- 复苏存活率低于承诺值（双人复核检测）
- 物种鉴定与订单不符
- 不予重发情形
- 解冻后常温放置超过30分钟
- 擅自更改CO₂浓度导致pH失衡
- 未使用推荐胶原包被培养器皿
- 超过建议代数仍要求质控达标
