一、细胞基本属性：
细胞名称：狗软骨细胞（Canine Chondrocytes）
细胞别称：犬关节软骨细胞；软骨细胞
种属来源：犬（Canis lupus familiaris）
年龄性别：健康成年犬（性别不限，供体筛选无关节病史）
组织来源：关节软骨组织
生长特性：贴壁生长（需胶原蛋白包被培养器皿）
细胞形态：多角形或梭形，单层培养时呈铺路石样排列
细胞代数：P2 - P6（维持软骨表型及基质分泌能力）
细胞规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含专用冻存液）
培养基：软骨细胞完全培养基（含1% ITS+Premix、50μg/mL抗坏血酸及10ng/mL TGF - β3）
培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：无动物源冻存液（含7.5% DMSO及海藻糖），液氮气相长期保存
倍增时间：约72 - 96小时（与传代次数及培养基活性相关）
供应限制：仅限体外研究使用，不可用于活体移植或药物生产
二、细胞培养操作指南：
收货处理：
冻存管复苏：37℃水浴快速解冻，加入3mL预温培养基低速离心（200g ×5min）后重悬接种
培养瓶运输：酒精擦拭外壁，静置培养箱4小时再换液
传代标准：融合度达80% - 85%（避免过度融合导致去分化）
传代比例：1:2至1:3（建议使用Ⅳ型胶原包被培养皿）
消化方法：
0.25%胰酶 - EDTA与0.2%胶原酶II联合消化
37℃分步消化10 - 15分钟，离心去除酶混合物
注意事项：
换液时保留30%原培养基以维持细胞外基质微环境
传代后48小时内避免频繁观察以防扰动贴壁
三、细胞冻存操作规范：
冻存液配方：无血清冻存液（含7.5% DMSO及0.1M海藻糖）
细胞密度：冻存浓度1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
冻存步骤：
消化后细胞悬液经4℃预冷冻存液重悬
程序降温：4℃平衡30分钟 → - 80℃梯度降温盒过夜 → 液氮长期储存
复苏验证：
复苏后48小时阿尔新蓝染色验证蛋白多糖分泌能力
免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达（P3代细胞阳性率需≥85%）
四、售后服务承诺：
重发标准：
1. 干冰运输全程未维持-70℃以下（需物流温度记录证明）
2. 到货7日内经qPCR检测确认支原体污染
3. 复苏后细胞贴壁率低于70%（需提供相差显微镜影像）
4. 物种鉴定与标识不符（STR检测犬源特异性位点）
不予重发情形：
1. 使用含胎牛血清培养基导致细胞异常肥大
2. 未按推荐进行胶原包被引起细胞脱落
3. 消化时间超过30分钟造成基质蛋白流失
4. 未经我方指导擅自进行三维支架培养
