一、细胞基本属性
细胞名称：大鼠胚胎成纤维细胞（Rat Embryonic Fibroblasts）
细胞别称：REF；胚胎成纤维细胞；原代成纤维细胞
种属来源：大鼠（Rattus norvegicus）
发育阶段：胚胎期（妊娠期14 - 18天）
组织来源：胚胎组织（经无菌解剖分离）
生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白或明胶包被培养器皿）
细胞形态：长梭形或星形，呈典型成纤维样辐射状伸展
细胞代数：P3 - P5（推荐使用代数，保证功能活性）
细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含含血清冻存液）
培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%非必需氨基酸+1%双抗）
培养条件：气相：5% CO₂+95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：含血清冻存液（含DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
倍增时间：~24 - 48小时（与血清浓度及传代密度相关）
供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或生物医药生产
二、细胞培养操作指南
收货处理：
冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基
培养瓶：酒精消毒外表面，静置培养箱4小时待细胞贴壁
传代标准：细胞融合度达80% - 90%（建议每2 - 3天传代）
传代比例：1:3至1:4（建议接种密度1×10^4 cells/cm²）
消化方法：
使用0.25% Trypsin - EDTA（含钙镁离子平衡液）
37℃消化3 - 5分钟，轻拍培养瓶促使细胞脱落
注意事项：
避免消化过度导致细胞膜损伤
首次传代后48小时内避免频繁观察扰动
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：含血清冻存液（含10% DMSO+40% FBS+基础培养基）
细胞密度：冻存浓度：5×10^5 - 1×10^6 cells/mL
冻存步骤：
消化收集细胞后离心去上清，轻柔重悬于预冷冻存液
程序降温：4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃过夜 → 液氮长期保存
复苏验证：
复苏后48小时检测贴壁率（应≥85%）
功能验证：细胞增殖能力检测（P3代细胞应保持活跃分裂）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 运输过程温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）
2. 到货72小时内证实微生物污染（需提供污染检测证据）
3. 细胞复苏存活率低于80%（台盼蓝染色法复检）
4. 物种鉴定结果与描述不符
不予重发情形：
1. 收货后超72小时未进行复苏操作
2. 自行修改培养基配方导致细胞异常
3. 未按要求使用包被培养器皿影响贴壁
4. 未定期进行支原体预防性检测
（注：所有操作需在二级生物安全柜中进行，实验废弃物按生物危害品规范处理）
