一、细胞基本属性
- 细胞名称:大鼠视网膜前体细胞(Rat Retinal Progenitor Cells)
- 细胞别称:视网膜祖细胞;RPC;视网膜干细胞
- 种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
- 年龄性别:胚胎期或新生大鼠(供体无眼部疾病史)
- 组织来源:视网膜神经上皮层(分离自视杯区域)
- 生长特性:贴壁生长(依赖基底膜基质或特定包被条件)
- 细胞形态:集落状生长,单细胞呈圆形或多极突起形态
- 细胞代数:P3 - P5(推荐使用代数以维持干性及分化潜能)
- 细胞规格:5×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
- 培养基:神经干细胞培养基(含B27添加剂、EGF及bFGF)
- 培养条件:气相:5% CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
- 冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存(-196℃)
- 倍增时间:~48 - 60小时(依赖生长因子浓度及细胞密度)
- 供应限制:仅限体外研究使用,不可用于临床或体内移植
二、细胞培养操作指南
- 收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去冻存液后重悬于预温培养基
- 培养瓶:酒精擦拭外表面,静置培养箱平衡1小时后观察贴壁状态
- 传代标准:细胞集落直径达150 - 200μm或密度达80% - 90%
- 传代比例:1:3至1:4(机械法或酶消化法分离集落)
- 消化方法:
- 使用Accutase或低浓度胰酶(0.02% Trypsin - EDTA)
- 37℃孵育3 - 5分钟,轻柔吹打至集落分散为单细胞
- 注意事项:
- 避免过度消化损伤细胞膜表面受体
- 传代后48小时内避免换液以维持生长因子浓度
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及海藻糖)
- 细胞密度:冻存浓度1×10^6 - 5×10^6 cells/mL
- 冻存步骤:
- 离心收集细胞,重悬于冻存液后分装至冻存管
- 程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃ 24小时→转移至液氮
- 复苏验证:
- 复苏后存活率≥85%(台盼蓝染色法)
- 分化潜能检测:诱导分化为视网膜神经元及胶质细胞(免疫荧光验证)
四、售后服务承诺
- 重发标准:
- 运输过程中液氮罐泄漏或温度异常(需提供物流温度记录)
- 到货72小时内检测出支原体污染(需提供第三方检测报告)
- 细胞复苏后存活率低于80%(附台盼蓝染色图片)
- 物种鉴定与描述不符(STR或物种特异性PCR验证)
- 不予重发情形:
- 未按规范进行细胞复苏(如室温解冻或延迟处理)
- 使用非指定培养基或自行添加未经验证的生长因子
- 实验操作导致细胞分化或功能丧失
- 未在指定代数范围内使用细胞导致性能下降