一、细胞基本属性
- 细胞名称：大鼠海马神经干细胞（Rat Hippocampal Neural Stem Cells）
- 细胞别称：RHNSC；海马神经前体细胞；神经干细胞
- 种属来源：大鼠（Rattus norvegicus）
- 年龄性别：新生或成年健康大鼠（性别不限，供体筛选无神经系统疾病史）
- 组织来源：海马组织（齿状回及室管膜区）
- 生长特性：贴壁/悬浮双相生长（依赖基质包被条件）
- 细胞形态：悬浮培养呈神经球样聚集，贴壁培养呈梭形或多极突起
- 细胞代数：P3 - P5（维持干细胞特性与分化潜能）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶（预包被基质）或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：神经干细胞专用培养基（含B27添加剂、EGF、bFGF）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 增殖能力：可形成神经球，连续传代后仍保留自我更新能力
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或动物活体移植
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入含10% FBS的预冷培养基离心去冻存液
- 培养瓶：75%酒精擦拭后静置培养箱30分钟平衡
- 传代标准：悬浮神经球直径达100 - 150μm或贴壁细胞融合度达70% - 80%
- 传代比例
- 悬浮神经球机械分散后按1:3接种，贴壁细胞按1:2消化传代
- 消化方法
- 贴壁细胞使用0.25% Trypsin - EDTA，37℃消化2 - 3分钟
- 悬浮神经球使用Accutase解离，37℃振荡5 - 8分钟
- 注意事项
- 避免长时间消化导致分化标志物表达
- 贴壁培养需提前使用多聚赖氨酸或层粘连蛋白包被培养器皿
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及神经保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 5×10⁶ cells/mL（神经球需解离为单细胞悬液）
- 冻存步骤
- 离心收集细胞后重悬于预冷冻存液
- 梯度降温：4℃ 30分钟 → -80℃过夜 → 转入液氮长期保存
- 复苏验证
- 复苏后48小时检测存活率（台盼蓝染色≥90%）
- 干性验证：Nestin免疫荧光染色阳性率＞95%
- 分化潜能检测：诱导分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供冻存管解冻后显微图像）
- 7天内证实支原体/真菌污染（需提供第三方检测报告）
- 细胞干性标志物表达率＜90%（需提供免疫荧光证据）
- 物种鉴定结果与大鼠基因组不符
- 不予重发情形
- 未按规范进行基质包被导致贴壁失败
- 使用含血清培养基诱导细胞自发分化
- 神经球传代时未充分解聚形成异常聚集
- 未定期进行核型分析或致瘤性检测
