一、细胞基本属性
- 细胞名称:大鼠嗅鞘细胞(Rat Olfactory Ensheathing Cells)
- 细胞别称:OECs;嗅神经鞘细胞;嗅鞘胶质细胞
- 种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
- 年龄性别:健康成年大鼠(性别不限,供体筛选无神经系统疾病史)
- 组织来源:嗅球或嗅神经组织
- 生长特性:贴壁生长(需包被多聚赖氨酸或层粘连蛋白基质)
- 细胞形态:典型双极或三极梭形,胞体细长,突起呈平行排列
- 细胞代数:P3 - P8(保持细胞功能活性及纯度)
- 细胞规格:5×10⁴ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
- 培养基:DMEM/F12基础培养基(含10% FBS、2mM谷氨酰胺、20ng/mL heregulin - β1)
- 培养条件:气相:5% CO₂+ 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
- 冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及葡萄糖保护剂), - 150℃以下长期保存
- 倍增时间:~72 - 96小时(依赖生长因子补充及基质包被)
- 供应限制:仅限科研用途,不可用于临床或药物开发
二、细胞培养操作指南
- 收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基;
- 培养瓶:酒精擦拭表面后静置培养箱1小时平衡温湿度。
- 传代标准:细胞融合度达80% - 90%(建议每5 - 7天传代一次)
- 传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
- 消化方法:使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含0.02%胶原酶);37℃消化3 - 5分钟,轻柔吹打至细胞脱离基质。
- 注意事项:
- 终止消化时添加含血清培养基中和酶活性;
- 传代后48小时内避免频繁移动培养瓶以促进贴壁。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO、20%葡萄糖及抗氧化剂)
- 细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤:离心收集细胞后轻柔重悬于冻存液;梯度降温:4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃过夜→液氮长期保存。
- 复苏验证:复苏后48小时检测细胞存活率(台盼蓝染色≥90%);功能验证:免疫荧光染色检测p75神经营养因子受体表达。
四、售后服务承诺
- 重发标准:
- 1. 运输温度异常导致细胞死亡(需提供物流温度记录);
- 2. 72小时内证实微生物污染(需提供污染检测图像);
- 3. 细胞贴壁率低于80%(需提供接种后24小时显微照片);
- 4. 标志性蛋白检测与说明书不符。
- 不予重发情形:
- 1. 未按推荐基质包被导致细胞贴壁失败;
- 2. 使用含高浓度抗生素的培养基干扰细胞状态;
- 3. 解冻后静置超过6小时未接种;
- 4. 未提供完整实验记录及原始数据。
(注:操作细节需结合实验室具体条件优化,建议首次使用时保留备份细胞。)