一、细胞基本属性
细胞名称:大鼠脾源性内皮祖细胞(Rat Spleen - derived Endothelial Progenitor Cells)
细胞别称:rSD - EPC;脾源性EPC;大鼠内皮祖细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:健康成年鼠(性别不限,供体经SPF级环境饲养)
组织来源:脾脏组织经密度梯度离心法分离
生长特性:贴壁生长(需纤维连接蛋白包被培养器皿)
细胞形态:初期呈梭形集落生长,传代后逐渐呈现鹅卵石样单层排列
细胞代数:P3 - P6(维持内皮祖细胞表面标志物表达特性)
细胞规格:5×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含专用无血清冻存液)
培养基:Endothelial Progenitor Cell Medium(含5% FBS+EPC特异性生长因子)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:饱和湿度
冻存条件:程序降温冻存液(含8% DMSO及海藻糖保护剂),液氮长期保存
倍增时间:约60 - 84小时(与细胞集落形成阶段相关)
供应限制:仅用于体外研究,不可用于活体移植或药物开发
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管复苏:37℃水浴轻摇解冻,加入3mL预温培养基低速离心(200g,5分钟)后重悬接种
培养瓶操作:酒精消毒外壁,静置30分钟后补充2mL新鲜培养基
传代标准:细胞集落覆盖率达80%或单层融合至90%
传代比例:1:2分瓶(建议接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含1mM Ca²⁺)
37℃消化3 - 5分钟,离心后重悬需轻柔吹打以保留细胞团簇结构
注意事项:
首次传代前需进行CD34/CD133免疫荧光鉴定
培养全程避免使用高浓度抗生素(建议青霉素浓度≤100U/mL)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无动物源成分冻存液(含人血清白蛋白替代物)
细胞密度:最佳冻存浓度2×10^6 cells/mL
冻存步骤:
消化后细胞经台盼蓝筛选,活率>95%时进行冻存
程序降温:4℃平衡15分钟 → 冻存管装入降温盒( - 1℃/min)至 - 80℃ → 24小时内转移至液氮
复苏验证:
复苏后48小时进行DiI - Ac - LDL摄取实验(阳性率应>70%)
血管生成能力检测:Matrigel基质管状结构形成实验(P4代细胞需维持成管潜能)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流温度记录显示超温超过30分钟(需提供温度追踪记录)
2. 到货7日内经流式细胞术检测CD31阳性率<85%
3. 细胞复苏后贴壁率低于60%(需提供相差显微镜观察记录)
4. 微生物检测报告显示污染(需第三方CMA认证报告)
不予重发情形:
1. 未使用原代配套培养基进行扩增培养
2. 消化过程采用机械刮除法代替酶消化
3. 实验过程中暴露于>10Gy辐射剂量环境
4. 未按要求进行定期支原体预防处理
注:本产品附有批次检测报告,包含VEGFR2免疫印迹结果及种群纯度分析数据,支持实验方案定制与技术咨询