一、细胞基本属性
细胞名称:大鼠骨髓基质干细胞
细胞别称:BMSC;骨髓间充质干细胞;骨髓基质细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:健康成年大鼠(性别不限,供体筛选无骨髓疾病史)
组织来源:股骨/胫骨骨髓腔单核细胞层
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:长梭形或成纤维细胞样,高核质比
细胞代数:P3 - P8(保持多向分化潜能及增殖活性)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:低糖DMEM+10% FBS+1%双抗+10ng/mL bFGF
培养条件:气相为5% CO₂,温度37℃,湿度95%
冻存条件:无血清冻存液(含DMSO及细胞保护剂),-150℃以下长期保存
倍增时间:约48 - 72小时(与接种密度及生长因子浓度相关)
供应限制:仅限于体外研究使用,不可用于临床或活体移植
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管复苏需37℃水浴快速解冻,离心去除冻存液后重悬于预热培养基。
培养瓶收货后酒精擦拭表面,静置培养箱4小时再换液。
传代标准:细胞融合度达80% - 90%时传代(通常每4 - 5天进行)
传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法:
使用0.25%胰酶 - EDTA溶液。
37℃消化2 - 3分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落。
注意事项:
终止消化时需加入含血清培养基中和。
首次换液建议在传代后48小时进行。
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及20% FBS)
细胞密度:冻存浓度1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
离心收集细胞后缓慢滴加冻存液混匀。
程序降温:4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期保存。
复苏验证:
复苏后48小时检测存活率(台盼蓝染色≥90%)
功能验证:成骨诱导7天后ALP染色阳性率>80%
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流温度记录异常导致细胞失活(需提供温度监控截图)
2. 到货72小时内检测出支原体污染(需提供检测原始数据)
3. 细胞复苏存活率低于85%(经第三方检测确认)
4. 种属鉴定结果与标识不符。
不予重发情形:
1. 未按规范进行细胞换液或传代操作
2. 使用非指定培养基导致分化异常
3. 液氮保存期间反复取出冻存管
4. 超过建议代数(P8)仍要求质保