一、细胞基本属性
- 细胞名称：大鼠中耳上皮细胞（Rat Middle Ear Epithelial Cells）
- 细胞别称：RMEC；中耳上皮细胞；鼓室上皮细胞
- 种属来源：大鼠（Rattus norvegicus）
- 年龄性别：健康成年大鼠（性别不限，供体筛选无中耳疾病史）
- 组织来源：中耳组织（鼓室黏膜上皮层）
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：单层铺展呈多角形，接触抑制后形成紧密连接结构
- 细胞代数：P3 - P8（确保功能稳定及遗传一致性）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：上皮细胞专用培养基（含2% FBS+表皮生长因子及肝素添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：约48 - 72小时（与培养密度及基质包被相关）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或动物实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基轻柔混匀
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置于培养箱平衡1小时
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（建议每3 - 5天传代一次）
- 传代比例：1:2至1:3（推荐接种密度4×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰酶 - EDTA（含Ca²⁺/Mg²⁺缓冲液）
- 37℃消化2 - 3分钟，镜下观察细胞边缘卷曲后终止
- 注意事项：
- 避免消化时间过长（防止紧密连接蛋白降解）
- 首次换液需在传代后12小时内完成
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化离心后重悬于冻存液，分装至冻存管
- 程序降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期存储
- 复苏验证：
- 复苏后24小时检测细胞存活率（台盼蓝染色≥90%）
- 功能验证：跨膜电阻检测（P5代细胞应维持屏障完整性）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 收到后72小时内证实微生物污染（需提供检测报告）
- 复苏存活率低于85%（需提供台盼蓝染色证据）
- 细胞STR谱系与备案不符
- 不予重发情形：
- 客户延迟复苏超过48小时
- 使用非指定培养基导致功能异常
- 未按梯度降温步骤导致冻存损伤
- 未执行标准支原体检测直接用于实验
