一、细胞基本属性
细胞名称:大鼠外根鞘细胞(Rat Outer Root Sheath Cells)
细胞别称:ORS细胞;毛囊外根鞘细胞;毛囊干细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:健康成年大鼠(性别不限,无皮肤病史)
组织来源:毛囊外根鞘组织
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:长梭形或多角形,呈铺路石样单层排列
细胞代数:P3 - P6(维持毛囊干细胞特性及分化潜能)
细胞规格:1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:DMEM/F12+10% FBS+表皮生长因子(10ng/mL)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含8% DMSO及海藻糖),液氮长期保存
倍增时间:约60 - 72小时(受培养密度及生长因子浓度影响)
供应限制:仅限体外研究使用,不可用于活体移植或药物生产
二、细胞培养操作指南
收货处理:
• 冻存管:37℃水浴解冻后离心去冻存液,加3mL预温培养基重悬
• 培养瓶:酒精擦拭后静置培养箱1小时再换液
传代标准:融合度达80% - 85%(避免过度融合导致自发分化)
传代比例:1:2至1:3(建议接种密度4×10³ cells/cm²)
消化方法:
• 使用0.25%胰蛋白酶 - 0.02% EDTA复合消化液
• 37℃消化3 - 5分钟,轻拍培养瓶促进细胞脱落
注意事项:
• 消化终止时需加入含血清培养基中和
• 推荐使用IV型胶原包被培养皿增强贴壁效率
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含8% DMSO+5%蔗糖)
细胞密度:1×10⁶ - 1.5×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
• 4℃预冷15分钟后分装入冻存管
• 程序降温:4℃ 30min → - 20℃ 2h → - 80℃ 12h → 液氮储存
复苏验证:
• 复苏后48小时检测CK15及KRT75标志物表达(流式细胞术)
• 克隆形成率检测应≥70%(P3代细胞标准)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度记录异常(需提供物流温度监控截图)
2. 到货7日内PCR检测证实支原体污染
3. 细胞活性低于85%(AO/PI双染法检测)
4. 种属鉴定与大鼠STR数据库不符
不予重发情形:
1. 未按手册要求进行胶原包被导致贴壁失败
2. 擅自添加分化诱导因子改变细胞特性
3. 使用非指定传代试剂造成细胞损伤
4. 超过14天未进行首次传代操作