一、细胞基本属性
细胞名称:大鼠乳腺上皮细胞(Rat Mammary Epithelial Cells)
细胞别称:RMEC;乳腺上皮细胞;乳腺细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:健康成年大鼠(性别依实验需求可选,供体经病理筛查无乳腺病变)
组织来源:乳腺组织原代分离
生长特性:贴壁生长(依赖胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:单层铺路石样排列,接触抑制后呈规则多边形
细胞代数:P3 - P8(经角蛋白18/19免疫荧光验证上皮特性)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:Mammary Epithelial Cell Medium(含5% FBS+表皮生长因子+氢化可的松)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含DMSO及细胞膜稳定剂),液氮气相长期保存
倍增时间:约48 - 72小时(与培养基批次及接种密度相关)
供应限制:仅用于基础研究,禁止临床、药物开发或转基因操作
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴轻柔摇晃解冻,加入5mL预热培养基离心洗涤
- 培养瓶:表面消毒后静置4小时再更换新鲜培养基
传代标准:融合度达80% - 90%(过度融合可能诱导成纤维细胞污染)
传代比例:1:2至1:4(建议接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25% Trypsin - 0.02% EDTA溶液
- 37℃消化3 - 5分钟,加入含血清培养基终止反应
注意事项:
- 建议使用胶原酶温和消化法维持细胞极性
- 传代后12小时补充5ng/mL表皮生长因子
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含8% DMSO+海藻糖)
细胞密度:冻存浓度1.5×10^6 cells/mL
冻存步骤:
- 4℃预冷15分钟后分装冻存管
- 程序降温:4℃ 30分钟 → -80℃ 24小时 → 液氮储存
复苏验证:
- 复苏后48小时进行CK18免疫荧光染色(阳性率需≥90%)
- 功能验证:β-酪蛋白分泌检测(传代后需维持泌乳相关基因表达)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 干冰耗尽或运输温度异常(需提供物流温度记录)
2. 到货72小时内证实微生物污染(需第三方检测报告)
3. 细胞存活率低于85%(台盼蓝染色/Calcein - AM双标验证)
4. 物种鉴定与STR分型不符
不予重发情形:
1. 解冻后未按规范离心去除冻存保护剂
2. 擅自使用Matrigel以外基质进行三维培养
3. 未定期进行支原体检测导致交叉污染
4. 超过推荐代数(P8)仍进行实验导致数据偏差