一、细胞基本属性
细胞名称:大鼠肠巨噬细胞(Rat Intestinal Macrophages)
细胞别称:肠道巨噬细胞、肠组织巨噬细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:健康成年大鼠(性别不限,供体无肠道疾病史)
组织来源:肠道组织(分离自小肠固有层)
生长特性:贴壁生长(需基质包被培养器皿)
细胞形态:不规则星形或阿米巴样,具有伪足延伸特性
细胞代数:P3 - P6(推荐使用代数以确保吞噬功能稳定性)
细胞规格:5×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:巨噬细胞专用培养基(含10% FBS + M - CSF补充因子)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含7% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
倍增时间:约72 - 96小时(与活化状态相关)
供应限制:仅用于体外研究,禁止临床或体内移植
二、细胞培养操作指南
收货处理:
· 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
· 培养瓶:酒精消毒表面后直接置于培养箱平衡
传代标准:融合度达80% - 90%(活化后增殖速度提升)
传代比例:1:2至1:3(推荐密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
· 使用细胞刮轻柔刮取或低浓度胰酶(0.25% Trypsin - EDTA)
· 37℃消化3 - 5分钟,显微镜下观察细胞边缘卷曲即终止
注意事项:
· 避免剧烈吹打(保护细胞表面受体)
· 活化建议:添加LPS(100ng/mL)或IFN - γ(20ng/mL)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含7% DMSO + 葡萄糖缓冲体系)
细胞密度:冻存浓度1×10^6 - 3×10^6 cells/mL
冻存步骤:
· 预冷冻存管分装后置于程序降温盒
· 梯度降温:4℃ 30分钟 → - 80℃ 24小时 → 液氮长期保存
复苏验证:
· 复苏后48小时检测CD68/CD163表达(流式细胞术≥90%)
· 功能验证:荧光微球吞噬实验(P4代细胞吞噬率应>80%)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输温度记录异常导致细胞失活(需提供温度追踪记录)
2. 72小时内经PCR确认微生物污染
3. 复苏存活率<85%(台盼蓝染色复检)
4. 流式检测标记物表达异常(需提供原始数据)
不予重发情形:
1. 使用非配套细胞因子进行长期培养
2. 未按规范进行细胞活化导致功能缺失
3. 采用机械吹打代替标准消化流程
4. 超过推荐代数(P6)后出现功能衰减
(注:所有操作需符合生物安全二级实验室规范,细胞特性可能因供体个体差异存在批次间波动)