一、细胞基本属性
细胞名称:C6+LUC大鼠脑胶质瘤细胞(绿色荧光标记)
细胞别称:C6 - LUC - GFP;大鼠胶质瘤荧光细胞;荧光标记胶质瘤模型细胞
种属来源:大鼠(Rattus norvegicus)
年龄性别:SD/Wistar大鼠(性别及周龄根据实验需求定制)
组织来源:脑胶质瘤组织(经慢病毒转染稳定表达荧光素酶及绿色荧光蛋白)
生长特性:贴壁生长(需胶原包被培养器皿)
细胞形态:不规则梭形或星形,荧光显微镜下可见绿色荧光标记
细胞代数:P5 - P15(建议使用10代内细胞以保证荧光标记稳定性)
细胞规格:1×10⁶ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:DMEM高糖培养基(含10% FBS + 1%双抗+5μg/mL Blasticidin维持筛选)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:含血清冻存液(含DMSO及荧光保护剂),液氮长期保存
荧光特性:GFP激发波长488nm/发射波长510nm,流式检测阳性率≥98%
供应限制:仅限肿瘤机制研究及活体成像实验,禁止临床或食品相关应用
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管:37℃水浴解冻后,离心去除冻存液,预包被培养皿接种
培养瓶:酒精擦拭后直接置于CO₂培养箱,24小时后首次换液
传代标准:融合度达80% - 90%(高密度易引发自发荧光淬灭)
传代比例:1:3至1:5(建议接种密度1×10⁴ cells/cm²)
消化方法:
使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含0.02%胶原酶)
37℃消化3 - 5分钟,离心后更换新鲜筛选培养基
注意事项:
传代时保留Blasticidin筛选压力
定期检测荧光强度(建议每3代进行流式细胞仪检测)
避免长时间曝光(荧光光源单次观察≤30秒)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:含20% FBS + 10% DMSO + GFP稳定剂
细胞密度:冻存浓度5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
冻存步骤:
离心后重悬于预冷冻存液
程序降温:4℃ 30分钟 → - 80℃ 24小时 → 液氮长期保存
复苏验证:
复苏存活率≥85%(台盼蓝染色法)
荧光表达效率≥95%(流式细胞术检测)
生物发光活性验证(接种48小时后注射D - 荧光素钾盐检测)
四、售后服务承诺
重发标准:
到货72小时内提供荧光缺失证明(流式检测报告)
STR鉴定与NCBI数据库不符(需提供第三方检测报告)
支原体污染经PCR验证确认(需提交电泳图及引物序列)
细胞活率低于80%且全程保存于液氮气相
不予重发情形:
未按规范维持Blasticidin筛选压力导致标记丢失
使用非专用胶原包被培养器皿影响贴附
活体成像实验前未进行体内荧光定标
自行改造细胞基因未提前报备