谷胱甘肽转移酶(GST; EC 2.5.1.18)是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,在生物体内发挥着重要的解毒和抗氧化作用。
定义与功能:
GST是一组酶,广泛分布于各种需氧生物中,包括人类肝脏、肾脏、小肠等多个组织。
GST的主要功能是催化谷胱甘肽(GSH)与各种亲电子化合物(如由氧化应激产生的物质)发生结合反应,将这些潜在毒性化合物转化为易于排泄的亲水物质,从而保护细胞免受损害。
GST还是细胞防御机制的重要组成部分,参与抗氧化防御、解毒环境毒物、药物代谢和肿瘤发生等多个生物学过程。
催化机制:
GST能够催化GSH与1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)等亲电子化合物结合,形成稳定的结合产物。
这种结合产物的光吸收峰波长为340nm,因此可以通过测定340nm波长处吸光度上升速率来计算GST的活性。
临床意义:
GST的血液水平可以受到多种因素的影响,包括遗传、环境暴露和特定疾病状态等。
由于GST在解毒和抗氧化方面的重要作用,其活性水平的变化可能与多种疾病的发生和发展有关。因此,GST常被用作探测一些疾病的标记物,如胃癌、大肠癌、肺癌等。
进行GST活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量GST催化GSH与CDNB结合产物在340nm波长处的吸光度。酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品的吸光度值,从而计算出GST的活性。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到340nm。同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。96孔板具有多个小孔,可以同时进行多个样品的测定,提高实验效率。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和试剂的加入量要准确。根据实验需求,可以选择无色透明、白色或黑色的96孔板。其中,无色透明孔板主要用于比色检测,适合本实验的需求。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取GST。低温条件有助于保持GST的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
水浴锅
用途:用于保持试剂或样品在特定温度下的稳定。在某些实验步骤中,需要将试剂或样品置于水浴锅中进行保温,以确保反应的顺利进行。
注意事项:在使用前需要设置好水浴锅的温度,并确保水浴锅内的水位足够。在使用过程中,要定期检查水浴锅的温度和水位,以确保实验的准确性。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
蒸馏水
用途:用于配制试剂和稀释样品溶液。蒸馏水的纯度高、无杂质,能够减少实验中的误差来源。
注意事项:在使用蒸馏水时,需要确保其干净无污染,并及时更换以保持其纯度。在配制试剂和稀释样品溶液时,要严格按照实验要求进行操作,以确保实验的准确性。
XM-W-AS008 谷胱甘肽S-转移酶(GST)说明书-微板法-96样.docx
XM-F-AS008 谷胱甘肽S-转移酶(GST)说明书-紫外分光法-48样.docx