单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR，EC 1.6.5.4）是抗坏血酸（AsA）再生过程中的一种关键酶，它在维持抗坏血酸的抗氧化特性方面发挥着重要作用。
定义与功能：
定义：MDHAR是一种氧化还原酶，属于黄素蛋白类，广泛存在于植物、动物和微生物中。
功能：MDHAR的主要功能是催化单脱氢抗坏血酸（MDHA）重新还原成抗坏血酸（AsA）。这一反应在抗坏血酸-谷胱甘肽循环（AsA-GSH循环）中至关重要，有助于维持细胞内抗坏血酸的水平，从而保持其抗氧化特性。
催化机制：
MDHAR催化NADH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）还原MDHA生成AsA和NAD+（氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）。在这一过程中，NADH作为电子供体，将电子传递给MDHA，使其还原为AsA。
活性测定方法：
MDHAR的活性可以通过测定NADH在340nm处的光吸收下降速率来计算。NADH在340nm处有特征吸收峰，而NAD+则没有。因此，当MDHAR催化NADH还原MDHA时，NADH的浓度会逐渐降低，导致340nm处的光吸收值下降。通过测定这一光吸收下降速率，可以间接计算出MDHAR的活性。
重要性：
MDHAR在维持抗坏血酸的抗氧化特性方面具有重要作用。抗坏血酸是一种重要的抗氧化剂，能够清除细胞内的活性氧（ROS）和其他过氧化物，保护细胞免受氧化损伤。MDHAR通过催化MDHA还原成AsA，有助于维持细胞内抗坏血酸的水平，从而保持其抗氧化能力。
进行MDHAR活性测定实验时，需要以下仪器和用品：
酶标仪
用途：用于测量NADH在340nm处的光吸收值。酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点，能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项：在使用前需要预热酶标仪，并调节波长到340nm。同时，要保持孔板洁净无异物遮盖，以确保测量结果的准确性。
96孔板（UV板）
用途：用于盛放待测样品溶液和试剂，便于高通量测定。UV板具有透明度高、光吸收性能好的特点，适合用于紫外光区的测定。
注意事项：在使用前需要确保每个小孔都干净无污染，并且样品和试剂的加入量要准确。
研钵
用途：用于研磨样品，使其达到实验所需的粒度。在MDHAR活性测定实验中，研钵可能用于研磨植物组织等样品，以便提取其中的MDHAR。
注意事项：在使用研钵时，要保持其干净无污染，并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途：用于保持样品在低温条件下，防止其发生降解或变性。在MDHAR活性测定实验中，冰可能用于冷却样品或试剂，以确保实验的准确性。
注意事项：在使用冰时，要确保其干净无污染，并及时更换以保持其低温效果。
台式离心机
用途：用于分离样品中的固体和液体成分，提取MDHAR。离心机通过高速旋转产生离心力，使样品中的不同成分分离。
注意事项：在使用前需要设置好离心参数（如转速、时间等），并确保离心机已平衡。在离心过程中，要密切关注离心机有无异常声音等状况，若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液枪
用途：用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液枪能够根据不同的实验需求调整移液量，确保实验的准确性和重复性。
注意事项：在使用可调式移液枪时，需要确保其已进行校准，并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时，要及时更换移液枪头，以防止交叉污染。
水浴锅
用途：用于保持试剂或样品在特定温度下的稳定。在某些实验步骤中，需要将试剂或样品置于水浴锅中进行保温，以确保反应的顺利进行。
注意事项：在使用前需要设置好水浴锅的温度，并确保水浴锅内的水位足够。在使用过程中，要定期检查水浴锅的温度和水位，以确保实验的准确性。
XM-F-AS011 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）-分光法48样.docx
XM-W-AS011 单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）-微板法96样.docx
