硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase，TrxR，EC 1.6.4.5）是一种在生物体内广泛存在且功能重要的酶。
定义与分类：
定义：TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员。
分类：根据分布区域的不同，TrxR存在三种同工酶，分别命名为硫氧还蛋白R1（TrxR1，细胞质型）、TrxR2（线粒体型）和TrxR3（主要在睾丸中表达，又名TGR）。其中，胞质型TrxR1发现最早，分布也最广泛，是目前研究得最多的一种同工酶。
功能与作用：
抗氧化作用：TrxR与硫氧还蛋白（Trx）和NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统，这一系统在氧化应激、细胞增殖、细胞凋亡等过程中发挥着重要的作用。TrxR通过催化NADPH还原氧化型硫氧还蛋白，使其变为还原态，从而参与抗氧化防御、蛋白质修复和转录调节等多种基于氧化还原的信号传导途径。
催化作用：TrxR与谷胱甘肽还原酶（GR）活性类似，能够催化GSSG（氧化型谷胱甘肽）还原生成GSH（还原型谷胱甘肽），是谷胱甘肽氧化还原循环中的关键酶之一。此外，TrxR还能催化NADPH还原DTNB（5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸））生成TNB（2-硝基-5-硫代苯甲酸）和NADP+，这一反应在硫氧还蛋白系统中具有重要意义。
活性测定方法：
原理：由于TNB在412nm波长处有特征吸收峰，因此可以通过测定412nm波长处TNB的增加速率来计算TrxR的活性大小。
步骤：通常需要使用特定的试剂盒进行测定，试剂盒中包含有用于抑制样本中原有还原型谷胱甘肽的试剂，以确保测定结果的准确性。测定过程中需要严格控制实验条件，如温度、pH值等，以确保测定结果的可靠性。
生理意义与应用：
生理意义：TrxR在维持机体氧化还原平衡、保护细胞免受氧化损伤等方面发挥着重要作用。其活性异常可能与多种疾病的发生和发展有关。
应用：TrxR的研究不仅有助于深入理解氧化应激相关疾病的发生机制，还为相关疾病的治疗提供了新的思路和方法。例如，通过调节TrxR的活性可以影响细胞的氧化还原状态，从而达到治疗疾病的目的。
进行TrxR活性测定实验时，需要以下仪器和用品：
酶标仪
用途：用于测定412nm波长处TNB的吸光值。酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点，能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项：在使用前需要预热酶标仪，并调节波长到412nm。同时，要保持孔板洁净无异物遮盖，以确保测量结果的准确性。
96孔板
用途：用于盛放待测样品溶液和试剂，便于高通量测定。96孔板具有多个小孔，可以同时处理多个样品，提高实验效率。
注意事项：在使用前需要确保每个小孔都干净无污染，并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途：用于分离样品中的固体和液体成分，提取TrxR或去除杂质。低温离心机能够在低温条件下进行离心操作，有助于保持样品的活性。
注意事项：在使用前需要设置好离心参数（如转速、时间、温度等），并确保离心机已平衡。在离心过程中，要密切关注离心机有无异常声音等状况。
水浴锅
用途：用于控制实验温度，确保实验在恒定的温度条件下进行。在TrxR活性测定实验中，水浴锅通常用于预热试剂或样品。
注意事项：在使用前需要设置好水浴锅的温度，并确保其稳定。在使用过程中，要定期检查水浴锅的温度是否准确，并避免水浴锅内的水蒸发干涸。
移液器
用途：用于精确移取样品溶液和试剂。移液器能够根据不同的实验需求调整移液量，确保实验的准确性和重复性。
注意事项：在使用移液器时，需要确保其已进行校准，并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时，要及时更换移液器头，以防止交叉污染。
蒸馏水
用途：用于配制试剂、稀释样品或清洗仪器等。蒸馏水具有纯净度高、无杂质等特点，是实验中常用的溶剂。
注意事项：在使用蒸馏水时，要确保其质量符合实验要求，并避免受到污染。
XM-F-AS016 硫氧还蛋白还原酶（TrxR）说明书-分光法-48样.docx
XM-W-AS016-96T 硫氧还蛋白还原酶（TrxR）说明书-微板法-96样.docx
