谷胱甘肽还原酶(GR)试剂盒-可见显色法

一、产品简介

谷胱甘肽还原酶（GR，EC 1.6.4.2）是一种在动植物中广泛存在的黄素蛋白氧化还原酶，具有显著的抗氧化功能。

1. 定义与功能：

• 定义：谷胱甘肽还原酶属于黄素蛋白二硫氧化还原酶家族，是一种重要的抗氧化酶。

• 功能：GR催化氧化型谷胱甘肽（GSSG）还原成还原型谷胱甘肽（GSH），这一反应在维持细胞内氧化还原平衡中起着关键作用。GSH作为一种重要的抗氧化剂，能够清除细胞内的活性氧（ROS）和其他过氧化物，保护细胞免受氧化损伤。

2. 催化机制：

• GR在NADPH的参与下，将GSSG还原为GSH，从而维持细胞内GSH/GSSG比率的动态平衡。GSH/GSSG比率越高，细胞清除氧化胁迫过程中产生的活性氧的能力越强。

3. 临床意义：

• GR酶活性高低是衡量氧化应激能力的一个重要指标。在各类肝脏疾病中，GR水平通常会有明显的伴随性升高，特别是在急性肝炎早期，GR比转氨酶更早增加达到峰值，因此被认为是肝损伤早期诊断的重要标志物之一。

• GR的测定还有助于评估肝脏的受损程度和恢复情况，与谷丙转氨酶、谷草转氨酶等肝功能指标联合检测，可以更全面地反映肝脏的实质受损进程和状态。

4. 试剂盒检测原理：

• 本试剂盒采用Ellman方法，通过DTNB（5,5'-二硫代二（硝基苯酚））与GR中GSSG还原产生的GSH反应，生成黄色产物（TNB）。

• TNB在412nm处有最大吸收峰，其生成量与GR活性成线性正相关。

• 通过测定412nm处的吸光值，可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。该方法在可见光下测定，检测产物相对传统测试方法具有灵敏度高、测定物更稳定、可操作性更强的优点。

二、所需的仪器和用品

进行谷胱甘肽还原酶活性测定实验时，需要以下仪器和用品：

1. 酶标仪

• 用途：用于测量黄色产物TNB在412nm波长处的吸光度。酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点，能够准确测定样品的吸光度值，从而计算出GR的活性。

• 注意事项：在使用前需要预热酶标仪，并调节波长到412nm。同时，要保持孔板洁净无异物遮盖，以确保测量结果的准确性。

2. 96孔板

• 用途：用于盛放待测样品溶液和试剂，便于高通量测定。96孔板具有多个小孔，可以同时进行多个样品的测定，提高实验效率。

• 注意事项：在使用前需要确保每个小孔都干净无污染，并且样品和试剂的加入量要准确。

3. 低温离心机

• 用途：用于分离样品中的固体和液体成分，提取GR。低温条件有助于保持GR的活性，减少其在处理过程中的损失。

• 注意事项：在使用前需要设置好离心参数（如转速、时间等），并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中，要密切关注离心机有无异常声音等状况，若出现异常状况应立即停止离心。

4. 水浴锅

• 用途：用于保持试剂或样品在特定温度下的稳定。在某些实验步骤中，需要将试剂或样品置于水浴锅中进行保温，以确保反应的顺利进行。

• 注意事项：在使用前需要设置好水浴锅的温度，并确保水浴锅内的水位足够。在使用过程中，要定期检查水浴锅的温度和水位，以确保实验的准确性。

5. 移液器

• 用途：用于精确移取样品溶液和试剂。移液器能够根据不同的实验需求调整移液量，确保实验的准确性和重复性。

• 注意事项：在使用移液器时，需要确保其已进行校准，并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时，要及时更换移液器头，以防止交叉污染。

6. 蒸馏水

• 用途：用于配制试剂和稀释样品溶液。蒸馏水的纯度高、无杂质，能够减少实验中的误差来源。

• 注意事项：在使用蒸馏水时，需要确保其干净无污染，并及时更换以保持其纯度。在配制试剂和稀释样品溶液时，要严格按照实验要求进行操作，以确保实验的准确性。

XM-F-AS009-48T 谷胱甘肽还原酶（GR）说明书-分光法-48样.docx

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