脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR，EC 1.8.5.1），又名谷胱甘肽脱氢酶（抗坏血酸）（Glutathione Dehydrogenase (ascorbate)），是植物体内一种重要的抗氧化酶。它广泛存在于叶绿体、线粒体和细胞质中，是抗坏血酸-谷胱甘肽循环（AsA-GSH循环）中的关键酶，对维持细胞中抗坏血酸的还原能力起着至关重要的作用。
定义与功能：
定义：DHAR是一种能够催化谷胱甘肽（GSH）还原脱氢抗坏血酸（DHA）生成抗坏血酸（AsA）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）的酶。
功能：在AsA-GSH循环中，DHAR通过催化GSH还原DHA，维持细胞内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分免受氧化损伤。抗坏血酸是一种重要的抗氧化剂，能够清除自由基，保护植物细胞免受氧化胁迫。
催化机制：
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA和GSSG，这一反应在AsA-GSH循环中至关重要。GSH作为电子供体，将电子传递给DHA，使其还原为AsA，同时自身被氧化为GSSG。
活性测定方法：
本试剂盒通过在265nm下检测AsA的生成速率来计算DHAR的酶活性大小。AsA在265nm处有特征吸收峰，其生成速率与DHAR的酶活性成正比。通过测定反应体系中AsA的生成量，可以间接计算出DHAR的酶活性。
重要性：
DHAR作为AsA-GSH循环中的关键酶，其活性和存在对于植物抵抗氧化胁迫、维持正常的生理功能以及适应逆境环境具有重要意义。通过不断催化DHA还原为AsA，DHAR为植物提供了持续的抗氧化保护，保障了植物的正常生长和发育。
进行DHAR活性测定实验时，需要以下仪器和用品：
酶标仪
用途：用于测量AsA在265nm处的光吸收值。酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点，能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项：在使用前需要预热酶标仪，并调节波长到265nm。同时，要保持孔板洁净无异物遮盖，以确保测量结果的准确性。
96孔板（UV板）
用途：用于盛放待测样品溶液和试剂，便于高通量测定。UV板具有透明度高、光吸收性能好的特点，适合用于紫外光区的测定。
注意事项：在使用前需要确保每个小孔都干净无污染，并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途：用于分离样品中的固体和液体成分，提取DHAR。低温条件有助于保持DHAR的活性，减少其在处理过程中的损失。
注意事项：在使用前需要设置好离心参数（如转速、时间等），并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中，要密切关注离心机有无异常声音等状况，若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途：用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量，确保实验的准确性和重复性。
注意事项：在使用可调式移液器时，需要确保其已进行校准，并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时，要及时更换移液器头，以防止交叉污染。
研钵
用途：用于研磨样品，使其达到实验所需的粒度。在DHAR活性测定实验中，研钵可能用于研磨植物组织等样品，以便提取其中的DHAR。
注意事项：在使用研钵时，要保持其干净无污染，并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途：用于保持样品在低温条件下，防止其发生降解或变性。在DHAR活性测定实验中，冰可能用于冷却样品或试剂，以确保实验的准确性。
注意事项：在使用冰时，要确保其干净无污染，并及时更换以保持其低温效果。
XM-W-AS012 脱氢抗环血酸还原酶（DHAR）试剂盒-微板法96样.docx
XM-F-AS012 脱氢抗环血酸还原酶（DHAR）试剂盒-分光法48样.docx
