总抗坏血酸(TAA)是维生素C在生物体内的存在形式,主要包括还原型和脱氢型抗坏血酸。
组成与性质:
还原型抗坏血酸:即维生素C,具有极强的还原性,极易被氧化。它是维持生物体正常生理功能所必需的营养素之一,参与体内多种代谢过程。
脱氢型抗坏血酸:是还原型抗坏血酸被氧化后的产物。虽然其生物活性较还原型抗坏血酸有所降低,但在某些条件下仍可以发挥一定的生理作用。
反应过程:
还原型抗坏血酸在生物体内或实验条件下容易被氧化为脱氢型抗坏血酸。这一反应是可逆的,即脱氢型抗坏血酸在特定条件下也可以被还原为还原型抗坏血酸。
脱氢型抗坏血酸与2,4-二硝基苯肼作用生成可溶于硫酸的红色脎。这一反应是总抗坏血酸含量测定的重要依据。
含量测定:
红色脎在520nm下有最大吸收峰,这一特性使得我们可以通过分光光度法来测定其含量。
通过测量红色脎的吸光度,并结合标准曲线,可以计算得到样品中总抗坏血酸的含量。
进行总抗坏血酸含量测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪:
用途:用于测量红色脎在520nm下的吸光度。酶标仪具有高精度、高灵敏度的特点,能够准确测定样品的吸光度值。
注意事项:在使用酶标仪前,需要确保其波长已调至520nm,并且仪器已进行预热和校准。
96孔板:
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂。96孔板具有多个小孔,可以同时进行多个样品的测定,提高实验效率。
注意事项:在使用96孔板时,需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和试剂的加入量要准确。
浓硫酸:
用途:用于溶解红色脎并调节溶液的酸度。浓硫酸具有强烈的腐蚀性,使用时需要特别小心。
注意事项:在加入浓硫酸时,需要边加边摇动试管,以防止温度过高导致炭化。同时,操作人员需要佩戴防护眼镜和手套等安全防护用品。
研钵:
用途:用于研磨样品,使其充分破碎并释放出抗坏血酸。研钵的使用有助于提高提取效率。
注意事项:在使用研钵时,需要确保其干净无污染,并且研磨过程中要避免样品损失。
冰:
用途:用于在样品处理过程中保持低温环境,防止抗坏血酸被氧化。低温条件有助于保持样品的稳定性。
注意事项:在使用冰时,需要确保其干净无污染,并且要及时更换以保持低温环境。
低温离心机:
用途:用于分离样品中的固体和液体成分。在提取过程中,通过离心可以将不溶性的杂质从样品溶液中分离出来,提高提取液的纯度。
注意事项:在使用低温离心机时,需要设置好离心参数(如转速、时间等),并确保离心机已进行预热和校准。
可调式移液器:
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并且移液过程中要避免气泡和溅出。
蒸馏水:
用途:用于配制试剂和稀释样品溶液。蒸馏水的纯度高、无杂质,能够减少实验中的误差来源。
注意事项:在使用蒸馏水时,需要确保其干净无污染,并且要及时更换以保持其纯度。
XM-F-AS001总抗坏血酸(TAA)说明书-分光法-48样红菲咯啉法.docx
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