一、细胞基本属性
- 细胞名称：GFP小鼠骨髓间充质干细胞永生化（GFP - mBMSC - Immortalized）
- 细胞别称：永生化GFP骨髓间充质干细胞；GFP标记小鼠BMSC
- 种属来源：小鼠（Mus musculus）
- 品系背景：C57BL/6（可根据需求提供其他品系定制服务）
- 组织来源：骨髓腔单核细胞层（经密度梯度离心法分离）
- 永生化方法：SV40大T抗原基因转导（经多代次验证遗传稳定性）
- 荧光标记：稳定表达绿色荧光蛋白（GFP，Ex/Em = 488/507nm）
- 生长特性：贴壁生长（依赖纤连蛋白包被基质）
- 细胞形态：长梭形或多角形，高核质比，可形成均一单层
- 细胞代数：P15 - P30（经端粒酶活性验证维持增殖能力）
- 细胞规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：α - MEM（含10% FBS+1%青霉素/链霉素+2mM L - 谷氨酰胺）
- 培养条件：气相：5%CO₂+95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含DMSO及海藻糖），液氮长期保存
- 荧光稳定性：传代10代内GFP阳性率≥98%（流式细胞术验证）
- 供应限制：仅限体外研究使用，不可用于活体移植或临床研究
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：冻存管解冻需37℃水浴快速复苏，离心去除冻存液后重悬于预温培养基；培养瓶运输需静置培养箱4小时后再换液。
- 传代标准：融合度达80% - 90%（建议每周传代1 - 2次）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：使用0.25%胰酶 - EDTA溶液，37℃消化2 - 3分钟，离心后完全培养基终止反应。
- 荧光维持：传代后48小时内避免强光照射，定期流式检测GFP表达强度。
- 注意事项：消化时需轻柔吹打防止细胞团块形成；建议使用纤连蛋白预包被培养器皿增强贴壁效率。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10%DMSO+10%海藻糖）
- 冻存密度：1×10⁶ - 5×10⁶ cells/mL（离心后去上清保留200μL冻存液）
- 冻存程序：程序降温：4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮气相长期保存。
- 复苏验证：存活率≥90%（台盼蓝染色法）；GFP阳性率≥95%（流式检测）。
- 功能验证：成骨/成脂诱导分化能力检测（每批次提供分化图像证据）。
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程液氮罐失效导致细胞失活（需提供温度记录仪数据）。
- 到货3天内证实支原体污染（需提供第三方检测报告）。
- GFP阳性率低于承诺值（流式检测原始数据为证）。
- 细胞增殖能力异常（提供传代记录与培养基批次号）。
- 免责条款：
- 客户未使用推荐包被基质导致贴壁失败。
- 持续强光照射导致GFP荧光淬灭。
- 未定期检测支原体造成污染扩散。
- 超过建议代数（P30）继续使用导致功能退化。
