一、细胞基本属性
- 细胞名称:人脂肪干细胞永生化(Human Adipose - Derived Stem Cells Immortalized)
- 细胞别称:HADSC - Im;永生化脂肪干细胞;ADSC - SV40
- 种属来源:人(Homo sapiens)
- 年龄性别:健康成人(性别不限,供体筛选无代谢性疾病史)
- 组织来源:皮下脂肪组织或腹腔脂肪组织(经胶原酶消化法分离)
- 生长特性:贴壁生长(依赖纤连蛋白或明胶包被培养表面)
- 细胞形态:长梭形或成纤维细胞样,单层贴壁后呈均匀纺锤状
- 细胞代数:P5 - P15(永生化处理确保稳定增殖与分化潜能)
- 细胞规格:1×10^6 cells/T75培养瓶 或1mL冻存管(含无血清冻存液)
- 培养基:间充质干细胞专用培养基(含10% FBS+双抗+成纤维细胞生长因子)
- 培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
- 冻存条件:无血清程序冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
- 倍增时间:~24 - 48小时(永生化处理显著提升增殖效率)
- 供应限制:仅限体外研究使用,不可用于临床治疗或体内移植
二、细胞培养操作指南
- 收货处理:冻存管复苏:37℃水浴快速解冻后,离心去除冻存液,重悬于预温培养基;培养瓶接收后酒精消毒表面,静置4小时再换液。
- 传代标准:细胞融合度达80% - 90%(推荐传代间隔2 - 3天)
- 传代比例:1:3至1:4(接种密度建议3×10³ cells/cm²)
- 消化方法:使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液,37℃消化2 - 3分钟,显微镜下观察细胞边缘卷曲后立即终止。
- 注意事项:避免消化时间过长(易损伤表面标志物CD73/CD90/CD105);传代后6小时内避免频繁移动培养瓶。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO、20%胎牛血清及渗透保护剂)
- 细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤:离心收集细胞,重悬于冻存液后分装至冻存管;程序降温:4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期储存。
- 复苏验证:复苏后存活率≥90%(台盼蓝染色法);分化能力验证:经成脂/成骨诱导21天后油红O/茜素红染色阳性。
四、售后服务承诺
- 重发标准:
- 运输温度异常导致细胞死亡(需提供物流温度记录证据)
- 5日内经第三方检测证实支原体污染(需提供检测报告)
- 细胞复苏后贴壁率低于80%
- 核型分析或端粒酶活性检测结果异常
- 不予重发情形:
- 未按说明书进行预包被培养表面处理
- 自行更换培养基导致分化功能丧失
- 超低温保存设备故障导致反复冻融
- 未执行标准传代流程引发遗传漂变