一、细胞基本属性
细胞名称：大鼠内皮祖细胞永生化（Immortalized Rat Endothelial Progenitor Cells）
细胞别称：iREPC；永生化内皮祖细胞；血管内皮前体细胞
种属来源：大鼠（Rattus norvegicus）
年龄性别：健康成年大鼠（性别不限，供体经无菌环境筛选）
组织来源：骨髓/外周血（经密度梯度离心法分离）
生长特性：贴壁生长（依赖纤连蛋白包被培养器皿）
细胞形态：纺锤形或多角形，高核质比，成簇生长特性
细胞代数：P15 - P30（经永生化处理，可稳定传代50代以上）
细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1.2mL冻存管（含专用无血清冻存液）
培养基：Endothelial Growth Medium - 2（含5% FBS+内皮祖细胞特需生长因子）
培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：程序降温专用冻存液（含7% DMSO及血清替代物），液氮气相长期保存
倍增时间：约24 - 36小时（永生化后增殖能力显著提升）
供应限制：仅用于体外研究，禁止体内移植或转化实验
二、细胞培养操作指南
收货处理：
- 冻存管：37℃水浴轻摇解冻，加入5mL预温培养基低速离心去冻存液
- 培养瓶：酒精擦拭外壁后直立静置1小时，缓慢倾斜至水平位
传代标准：融合度达80% - 90%（永生化细胞可耐受更高密度培养）
传代比例：1:4至1:6（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含1mM EDTA）
- 37℃消化3 - 5分钟，细胞边缘卷曲时轻拍瓶壁辅助脱离
注意事项：
- 永生化细胞贴壁性较弱，消化后需200×g离心3分钟确保收集完全
- 传代后12小时内避免移动培养器皿以防悬浮
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：无动物源成分冻存液（含7% DMSO+海藻糖保护体系）
细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
冻存步骤：
- 消化后细胞悬液与冻存液按1:1体积混合
- 程序降温仪梯度冷冻：-1℃/min至-80℃，24小时后转入液氮
复苏验证：
- 复苏后12小时检测CD34+/VEGFR2+双标记阳性率≥90%
- 功能验证：Matrigel成管实验（P20代细胞应保持血管生成能力）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 液氮罐运输温度记录异常（需提供物流温度监控数据）
2. 到货7日内PCR检测证实支原体污染
3. 流式细胞术检测永生化标志物（如SV40大T抗原）表达缺失
4. 细胞复苏后72小时内增殖停滞（需提供每日显微记录）
不予重发情形：
1. 未使用配套包被试剂导致细胞贴壁失败
2. 擅自改用悬浮培养体系引发表型改变
3. 超过推荐传代次数（P35）后出现的基因不稳定
4. 未执行定期支原体预防处理导致的污染扩散
（注：所有数据基于本实验室标准操作流程验证，建议用户建立个性化质控体系）
