一、细胞基本属性
细胞名称：雪貂鼻腔粘膜上皮细胞永生化
细胞别称：FNMEC - i；永生化雪貂鼻上皮细胞；Mustela鼻粘膜上皮细胞
种属来源：雪貂（Mustela putorius furo）
年龄性别：健康成年雪貂（性别不限，供体筛选无呼吸道疾病史）
组织来源：鼻腔粘膜组织（经内窥镜无创取样）
生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
细胞形态：融合后呈紧密镶嵌排列，单层多角形结构
细胞代数：P4 - P10（经SV40 LT抗原转染稳定增殖）
细胞规格：1×10⁵ cells/T25胶原包被培养瓶或1mL冻存管（无血清冻存体系）
培养基：Epithelial Airway Medium（含1.2% Ca²⁺ + 5ng/mL EGF+ 50μg/mL BPE）
培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：85%（模拟呼吸道微环境）
冻存条件：无动物源冻存液（含7% DMSO +海藻糖保护剂），液氮气相长期保存
倍增时间：~36 - 48小时（与纤毛分化状态负相关）
供应限制：仅用于呼吸道疾病机制研究，禁止体内移植或转基因操作
二、细胞培养操作指南
收货处理：
冻存管复苏：37℃水浴30秒内解冻，预加温培养基按1:3比例梯度稀释
包被培养瓶：使用0.1mg/mL胶原IV预包被4小时，PBS漂洗后接种
传代标准：细胞融合度达80 - 90%（纤毛分化程度影响传代频率）
传代比例：1:2至1:3（建议维持2×10⁴ cells/cm²接种密度）
消化方法：
采用0.02%胰酶+0.01% EDTA混合消化液（含10μM Y - 27632 Rho激酶抑制剂）
37℃消化30 - 45秒，显微镜下观察到细胞间隙增大立即终止
注意事项：
禁止使用机械刮除法（防止纤毛结构损伤）
传代后需维持气液界面培养（24小时后再补充培养基）
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：无血清冻存液（含7% DMSO+0.1M海藻糖+1% HSA）
细胞密度：1 - 2×10⁶ cells/mL（保留分化标记物表达能力）
冻存步骤：
预冷程序：4℃平衡15分钟后移入冻存盒
梯度降温：-80℃过夜后转入液氮气相（降温速率-1℃/min）
复苏验证：
存活率检测：复苏后12小时黏附率≥85%，纤毛再生率≥30%
功能验证：MUC5AC分泌量检测（P6代细胞应维持黏液分泌功能）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 干冰运输链中断导致细胞结冰（需提供融化状态视频证据）
2. 72小时内证实呼吸道病毒污染（需提供RT - PCR检测结果）
3. 纤毛分化标志物FOXJ1表达缺失（需提供免疫荧光图像）
4. 端粒酶活性检测结果低于承诺值（需第三方检测报告）
不予重发情形：
1. 未使用胶原包被培养器皿导致细胞脱落
2. 擅自添加地塞米松等激素影响分化进程
3. 超过14天未更换气液界面培养液
4. 未按规范进行气道上皮模型构建
