一、细胞基本属性
- 细胞名称：鸡胚成纤维细胞永生化（Immortalized Chicken Embryo Fibroblasts）
- 细胞别称：CEF - i；永生化鸡胚成纤维细胞；禽类成纤维细胞系
- 种属来源：鸡（Gallus gallus domesticus）
- 胚胎阶段：9 - 11日龄鸡胚（健康种蛋孵化，无病原体感染）
- 组织来源：鸡胚真皮层或结缔组织
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原或明胶包被培养器皿）
- 细胞形态：典型长梭形或纺锤状，单层贴壁时呈放射状排列
- 永生化方法：SV40 Large T抗原或hTERT基因转染（核型稳定，无致瘤性）
- 细胞代数：P15 - P30（增殖能力稳定，无衰老迹象）
- 细胞规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含血清替代型冻存液）
- 培养基：DMEM/F12（含10%胎牛血清+1%非必需氨基酸+2mM L - 谷氨酰胺）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无动物源冻存液（含5% DMSO+海藻糖），液氮长期保存
- 倍增时间：~24 - 36小时（与血清浓度及传代密度相关）
- 供应限制：研究级产品，不可用于疫苗生产或活体动物实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶：表面消毒后直接置于CO₂培养箱，静置4小时再换液
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（建议每2 - 3天传代）
- 传代比例：1:4至1:6（推荐接种密度2×10^4 cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.1%胶原酶预消化5分钟）
- 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
- 注意事项：
- 传代后需添加2倍浓度血清中和消化酶
- 避免频繁观察扰动未贴壁细胞（贴壁时间需4 - 6小时）
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含5% DMSO+10%海藻糖+胎牛血清替代物）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化后离心收集细胞，预冷冻存液重悬
- 程序降温：4℃ 30min→ - 20℃ 1h→ - 80℃过夜→液氮气相保存
- 复苏验证：
- 复苏后贴壁率≥85%（12小时观察）
- 功能验证：细胞增殖曲线测定（P20代内应保持对数生长期特性）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度记录异常导致细胞失活（需提供温度追踪数据）
- 到货72小时内证实支原体污染（需提供荧光定量PCR结果）
- 复苏后贴壁率低于80%（需提供明场显微图像）
- 永生化标记基因检测与描述不符
- 不予重发情形：
- 使用非推荐包被材料导致贴壁失败
- 未按规范进行传代（如过度消化或接种密度过低）
- 自行添加生长因子改变培养基成分
- 超过建议代数（P30）后出现增殖速率下降
