一、细胞基本属性
1. 细胞名称:猪子宫内膜上皮细胞永生化(Immortalized Porcine Endometrial Epithelial Cells)
2. 细胞别称:iPEEC;永生化猪子宫内膜上皮细胞
3. 种属来源:家猪(Sus scrofa domesticus)
4. 年龄性别:健康成年母猪(供体经筛选无生殖系统疾病史)
5. 组织来源:子宫角内膜组织
6. 生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白或细胞外基质包被培养器皿)
7. 细胞形态:单层铺展,融合后呈典型多边形或“铺路石”样排列
8. 细胞代数:P3 - P10(经永生化处理,保持增殖稳定性)
9. 细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
10. 培养基:专用上皮细胞培养基(含5% FBS+表皮生长因子+胰岛素转铁蛋白硒添加剂)
11. 培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
12. 冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮气相长期保存
13. 倍增时间:约36 - 48小时(与细胞密度及培养基批次相关)
14. 供应限制:仅限于体外研究使用,禁止用于活体移植或生物制品生产
二、细胞培养操作指南
1. 收货处理
- 冻存管:37℃水浴解冻后,离心去除冻存液,重悬于预热培养基
- 培养瓶:酒精擦拭外表面,静置于培养箱1小时恢复微环境
2. 传代标准:细胞融合度达80% - 90%(推荐传代间隔48 - 72小时)
3. 传代比例:1:2至1:3(建议初始接种密度1×10⁴ cells/cm²)
4. 消化方法
- 使用0.25% Trypsin - EDTA(含0.02% EDTA)
- 37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落,加入含血清培养基终止
5. 注意事项
- 避免消化时间过长(防止细胞膜完整性受损)
- 传代后12小时内避免频繁移动培养瓶以促进贴壁
三、细胞冻存操作规范
1. 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+90%基础培养基+抗冻蛋白)
2. 细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
3. 冻存步骤
- 消化后离心收集细胞,轻柔重悬于预冷冻存液
- 程序降温:4℃ 30分钟→ - 20℃ 1小时→ - 80℃过夜→液氮储存
4. 复苏验证
- 复苏后存活率≥90%(台盼蓝染色法)
- 功能验证:细胞角蛋白18免疫荧光染色阳性率>95%
四、售后服务承诺
1. 重发标准
- 运输温度记录异常导致细胞失活(需提供温度追踪报告)
- 到货72小时内证实微生物污染(需提供第三方检测证明)
- 细胞复苏存活率低于85%(按我方提供方法检测)
- 永生化标记基因PCR验证不通过
2. 不予重发情形
- 未按说明书进行预包被处理导致贴壁失败
- 自行更换培养基或添加剂引发细胞异常
- 超低温保存设备故障导致的反复冻融
- 未使用指定传代试剂造成细胞功能损伤
(注:所有操作需符合生物安全规范,实验废弃物需灭菌处理)