一、细胞基本属性
- 细胞名称：猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化（Immortalized Porcine Nasal Mucosal Epithelial Cells）
- 细胞别称：iPNMEC；永生化猪鼻粘膜上皮细胞
- 种属来源：家猪（Sus scrofa domesticus）
- 年龄性别：健康成年猪（性别不限，供体筛选无呼吸道疾病史）
- 组织来源：鼻腔粘膜上皮层
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白涂层培养器皿）
- 细胞形态：典型“铺路石样”单层排列，接触抑制后呈扁平多边形
- 细胞代数：P3 - P10（经SV40 T抗原转导，增殖能力稳定）
- 细胞规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：Epithelial Cell Medium（含1% FBS+表皮生长因子/氢化可的松添加剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：~36 - 48小时（依赖培养密度及生长因子浓度）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或动物活体实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基。
- 培养瓶：75%酒精表面消毒，静置培养箱4小时平衡温湿度。
- 传代标准：细胞融合度达90%-95%（建议每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:2至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA（含0.02%胶原酶）。
- 37℃消化2 - 3分钟，镜下观察细胞边缘卷曲后立即终止。
- 注意事项：
- 避免机械刮取（损伤微绒毛结构）。
- 传代后6小时内避免移动培养瓶以防脱壁。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO+海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化离心后缓慢滴加冻存液，轻柔混匀。
- 程序降温：4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃ 12h → 液氮长期储存。
- 复苏验证：
- 复苏后48小时存活率≥85%（台盼蓝染色法）。
- 功能验证：黏液分泌染色（阿尔新蓝染色阳性率＞90%）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 干冰运输超温导致细胞失活（需提供温度记录仪数据）。
- 7天内证实真菌/支原体污染（需提供第三方检测报告）。
- 细胞复苏存活率低于85%。
- 永生化标志物PCR验证不通过。
- 不予重发情形：
- 超时复苏（收货＞72小时未处理）。
- 自行更换培养基导致分化异常。
- 实验污染未及时反馈（超过14天）。
- 未按手册进行胶原包被直接接种。
备注：本产品适用于呼吸道病原体感染机制、黏膜免疫及屏障功能研究，具体操作请参阅附页《永生化细胞特性验证指南》。
