一、细胞基本属性
- 细胞名称：猪肝星状细胞永生化（Immortalized Porcine Hepatic Stellate Cells）
- 细胞别称：Hepatic Stellate Cells (HSC)；肝星状细胞；肝窦周细胞
- 种属来源：猪（Sus scrofa domesticus）
- 年龄性别：健康成年猪（性别不限，供体筛选无肝脏疾病史）
- 组织来源：肝脏组织窦周区域
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原基质或特定包被培养器皿）
- 细胞形态：静息状态下呈扁平星状，活化后转变为纺锤形或多突形
- 细胞代数：P3 - P10（经永生化处理，增殖能力稳定）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：专用肝星状细胞培养基（含5% FBS+肝细胞生长因子及抗生素）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：约48 - 72小时（依赖活化状态及培养条件）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或动物体内实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入预热的培养基离心去除冻存液后重悬
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置于培养箱平衡1小时
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（建议每4 - 5天传代一次）
- 传代比例：1:2至1:3（推荐接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA（含Ca²⁺/Mg²⁺平衡液）
- 37℃消化3 - 5分钟，镜下观察细胞边缘卷曲后立即终止
- 注意事项：
- 避免频繁传代导致表型漂移（建议定期检测α - SMA表达）
- 传代后48小时内避免换液以维持细胞粘附
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及海藻糖保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化离心后重悬细胞于冻存液，分装至冻存管
- 程序降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存
- 复苏验证：
- 复苏后48小时检测存活率（台盼蓝染色≥90%）
- 功能验证：胶原分泌能力检测（P5代细胞应保持活化特性）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 1.运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供物流温度记录）
- 2.5日内证实细菌/真菌污染（需提供污染检测影像）
- 3.细胞活力低于85%（经第三方检测报告）
- 4.永生化标志物（如SV40抗原）表达缺失
- 不予重发情形：
- 1.未按说明书进行预包被处理导致细胞贴壁失败
- 2.使用非推荐生长因子或抑制剂干扰细胞状态
- 3.未定期检测支原体引发交叉污染
- 4.细胞培养超过推荐代数（P10）后出现功能异常
