一、细胞基本属性
细胞名称：湖羊瘤胃上皮细胞永生化（Immortalized Ovine Rumen Epithelial Cells）
细胞别称：iOREC；永生化瘤胃上皮细胞；反刍动物胃上皮细胞系
种属来源：湖羊（Ovis aries）
年龄性别：健康成年湖羊（性别不限，供体经病原体筛查）
组织来源：瘤胃组织黏膜层上皮
生长特性：贴壁生长（需胶原蛋白包被培养器皿）
细胞形态：单层铺展，接触抑制后呈多角形或铺路石样排列
细胞代数：P5 - P20（经SV40 T抗原永生化处理，遗传稳定性验证）
细胞规格：1×10⁶ cells/T75培养瓶或1.2mL冻存管（含无血清冻存液）
培养基：DMEM/F12 + 10% FBS + 表皮生长因子（10ng/mL）+ 胰岛素 - 转铁蛋白 - 硒添加剂
培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：无血清冻存液（含8% DMSO及海藻糖保护剂），液氮气相长期保存
倍增时间：约36 - 48小时（依赖培养基成分及接种密度）
供应限制：仅用于反刍动物消化机理研究，禁止生物医药临床应用
二、细胞培养操作指南
收货处理：
• 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预温培养基轻柔混匀
• 培养瓶：表面消毒后直接置于CO₂培养箱平衡4小时
传代标准：融合度达80% - 90%（建议每2 - 3天传代）
传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
消化方法：
• 使用0.25%胰蛋白酶 - 0.02% EDTA溶液
• 37℃消化2 - 3分钟，显微镜下观察到细胞间隙增大后立即终止
注意事项：
• 维持钙离子浓度（0.1mM）以保护紧密连接结构
• 首次传代前需进行角蛋白18免疫荧光鉴定
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：无血清冻存液（含8% DMSO + 5%海藻糖）
细胞密度：1.5×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
冻存步骤：
• 4℃预冷离心后轻缓重悬于冻存液
• 程序降温：4℃ 30min → -20℃ 1h → -80℃ 12h → 液氮长期存储
复苏验证：
• 复苏后48小时进行活力检测（台盼蓝拒染率≥90%）
• 功能验证：跨膜电阻值检测（传代10次后TEER值应＞200Ω·cm²）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 运输温度记录异常（需提供温度追踪曲线）
2. 7日内经qPCR证实支原体污染
3. 细胞活性低于85%（附流式细胞仪检测报告）
4. 物种鉴定STR分型不符
不予重发情形：
1. 解冻后超48小时未贴壁即判定失效
2. 自行更换培养基导致功能异常
3. 未按规范进行传代（如机械刮除法破坏膜蛋白）
4. 未使用推荐胶原包被培养器皿
