一、细胞基本属性
- 细胞名称：小鼠肺成纤维细胞永生化（Immortalized Mouse Lung Fibroblasts）
- 细胞别称：MLF - Im；永生化肺成纤维细胞；小鼠肺间质细胞
- 种属来源：小鼠（Mus musculus，品系C57BL/6）
- 遗传背景：SV40大T抗原介导永生化处理（经STR验证无交叉污染）
- 组织来源：肺组织成纤维细胞分离培养后永生化
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原包被培养器皿）
- 细胞形态：长梭形或纺锤状，贴壁伸展后呈现典型成纤维样分支结构
- 细胞代数：P10 - P20（永生化后遗传稳定性高，增殖能力持续）
- 细胞规格：5×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%双抗+2mM L - 谷氨酰胺）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含8% DMSO及细胞保护剂），液氮长期保存
- 增殖能力：持续稳定增殖（无接触抑制特性）
- 供应限制：仅限基础研究使用，不可用于体内实验或商业用途
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管复苏：37℃水浴解冻后，1200rpm离心3分钟去除冻存液，重悬于预热培养基
- 培养瓶操作：表面酒精消毒后静置30分钟，再移入培养箱
- 传代标准：融合度达90% - 95%（推荐传代间隔48 - 72小时）
- 传代比例：1:3至1:5（初始接种密度建议1×10^4 cells/cm²）
- 消化方法
- 使用0.25% Trypsin - EDTA溶液
- 37℃消化2 - 3分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
- 关键注意
- 永生化细胞增殖迅速，需每日观察密度变化
- 传代后6小时内避免移动培养瓶以保证贴壁
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液组成：基础培养基+10% DMSO+20% FBS
- 冻存密度：5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
- 操作流程
- 对数生长期细胞经胰酶消化后计数
- 梯度降温程序：4℃ 30分钟→ - 80℃ 24小时→液氮储存
- 质检标准
- 复苏存活率≥90%（台盼蓝染色法）
- 功能验证：α - SMA免疫荧光染色确认成纤维细胞特性
四、售后服务承诺
- 质保范围
- 液氮运输中发生干冰耗尽导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 到货72小时内经检测存在支原体污染（需提供第三方检测报告）
- 永生化标志物（SV40 T抗原）PCR检测结果为阴性
- 免责条款
- 客户未使用胶原包被培养器皿导致贴壁失败
- 自行改用无血清培养基引发细胞凋亡
- 未按规范进行传代导致细胞过度老化
- 液氮储存中断超过72小时
