一、细胞基本属性
细胞名称
人原代髓核细胞永生化（Immortalized Human Nucleus Pulposus Cells）
细胞别称
iHNPC；永生化髓核细胞；椎间盘髓核细胞
种属来源
人（Homo sapiens）
年龄性别
健康成人（性别不限，供体筛选无脊柱疾病史）
组织来源
椎间盘髓核组织（经伦理审查及组织捐献程序获取）
生长特性
贴壁生长（需胶原基质包被培养器皿）
细胞形态
多角形或梭形，单层贴壁后呈融合状生长
细胞代数
P3 - P10（永生化处理确保遗传稳定性及功能延续性）
细胞规格
1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
培养基
髓核细胞专用培养基（含5% FBS+ TGF - β1及FGF - 2生长因子）
培养条件
气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件
无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
倍增时间
~36 - 48小时（与培养基活性及接种密度相关）
供应限制
仅限科研用途，不可用于临床治疗或基因编辑研究
二、细胞培养操作指南
收货处理
冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基
培养瓶：75%酒精表面消毒，静置培养箱1小时平衡温湿度
传代标准
细胞融合度达80% - 90%（推荐每2 - 3天传代一次）
传代比例
1:2至1:4（建议接种密度3×10³ cells/cm²）
消化方法
使用0.25%胰酶 - 胶原酶混合消化液（含1mM EDTA）
37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁至细胞脱落后终止
注意事项
避免机械刮取损伤细胞膜完整性
传代后48小时内监测细胞外基质分泌功能
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方
无血清冻存液（含10% DMSO及海藻糖保护剂）
细胞密度
冻存浓度：5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤
离心收集细胞后轻柔重悬于冻存液
程序降温：4℃ 30min → -80℃过夜 → 液氮长期保存
复苏验证
复苏后24小时存活率≥90%（台盼蓝染色法）
功能验证：qPCR检测Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达（P5代细胞维持分化特性）
四、售后服务承诺
重发标准
1. 干冰运输超时导致细胞失活（需提供物流温度记录）
2. 5日内证实支原体/真菌污染（需提供荧光定量PCR报告）
3. 细胞增殖速率低于说明书标注的80%
4. STR图谱与数据库记录不符
不予重发情形
1. 解冻后超72小时未进行换液操作
2. 未使用胶原包被培养器皿导致贴壁失败
3. 擅自进行超高速离心（>300g）损伤细胞
4. 未按规范检测细胞分化标志物即用于实验
