一、细胞基本属性
- 细胞名称:猪扁桃体上皮细胞永生化(Immortalized Porcine Tonsil Epithelial Cells)
- 细胞别称:IPETEC;猪扁桃体上皮细胞;永生化扁桃体上皮细胞
- 种属来源:猪(Sus scrofa domesticus)
- 年龄性别:健康成年猪(性别不限,供体经病原体检测合格)
- 组织来源:扁桃体组织上皮层
- 生长特性:贴壁生长(依赖胶原蛋白包被培养器皿)
- 细胞形态:单层铺展呈多边形,接触抑制后形成紧密连接
- 细胞代数:稳定传代至P15 - P20(经永生化处理,增殖能力增强)
- 细胞规格:1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
- 培养基:Epithelial Cell Growth Medium(含5% FBS + 表皮生长因子 + 抗生素)
- 培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
- 冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
- 增殖能力:稳定增殖(永生化处理消除衰老屏障,传代周期约48小时)
- 应用限制:仅限体外研究,不可用于活体移植或疾病治疗
二、细胞培养操作指南
- 收货处理:冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基;培养瓶:表面消毒后静置培养箱1小时恢复代谢
- 传代标准:细胞融合度达80% - 90%(推荐每2 - 3天传代一次)
- 传代比例:1:3至1:4(初始接种密度建议1×10^4 cells/cm²)
- 消化方法:使用0.25%胰酶 - EDTA(含钙离子螯合剂),37℃消化3 - 5分钟,轻柔吹打至完全脱离
- 注意事项:避免消化液残留(传代后6小时需换液);永生化细胞贴壁能力较弱,离心速度建议≤200×g
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO + 90%培养基)
- 冻存密度:1×10^6 cells/mL(每支冻存管分装1mL)
- 冻存步骤:离心收集细胞后重悬于冻存液;程序降温:4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃过夜→液氮储存
- 复苏验证:复苏存活率≥85%(台盼蓝染色法);永生化标志物检测(SV40 T抗原免疫荧光确认)
四、售后服务承诺
- 重发标准:
- 运输过程温度异常导致细胞死亡(需提供物流温度记录)
- 5个工作日内证实支原体污染(需提供第三方检测报告)
- 永生化标志物表达缺失(经qPCR或Western Blot验证)
- 不重发情形:
- 未使用指定包被培养皿导致贴壁失败
- 自行修改培养基配方引发细胞状态异常
- 未按规范进行冻存导致复苏存活率不足
- 实验操作污染(如交叉污染或无菌操作失误)