一、细胞基本属性
- 细胞名称：GFP人胆囊上皮细胞永生化（GFP - Immortalized Human Gallbladder Epithelial Cells）
- 细胞别称：GFP - HGBEC；永生化胆囊上皮细胞；GFP标记胆囊上皮细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：健康成人（性别不限，供体筛选无肝胆系统疾病史）
- 组织来源：胆囊组织上皮层
- 生长特性：贴壁生长（依赖细胞外基质及特定生长因子）
- 细胞形态：单层铺路石样排列，融合后呈多边形，GFP荧光标记清晰可见
- 细胞代数：P5 - P15（经永生化处理，增殖能力稳定且保留上皮特性）
- 细胞规格：1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：专用上皮细胞培养基（含2% FBS + EGF/EGF类似物+GFP表达维持剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂+95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：~36 - 48小时（永生化处理确保稳定增殖）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或活体实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基轻柔混匀
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置培养箱平衡1小时
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（推荐每2 - 3天传代）
- 传代比例：1:3至1:4（建议接种密度4×10³ cells/cm²）
- 消化方法
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA（含Ca²⁺/Mg²⁺缓冲液）
- 37℃消化2 - 3分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落，镜下确认后立即终止
- 注意事项
- 避免消化过度损伤细胞膜完整性（影响GFP荧光强度）
- 传代后12小时内更换新鲜培养基，清除残余消化酶
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及低温保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤
- 离心收集细胞，轻柔重悬于预冷冻存液
- 程序降温：4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃ 12小时→液氮长期保存
- 复苏验证
- 复苏后24小时检测细胞存活率（台盼蓝染色≥90%）
- 功能验证：GFP荧光强度检测（P8代内荧光信号衰减率≤5%）
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输过程温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录证明）
- 到货72小时内检出支原体/细菌污染（需提交第三方检测报告）
- 细胞复苏存活率低于90%（台盼蓝染色法）
- GFP荧光信号强度未达标准（流式检测荧光阳性率＜95%）
- 不予重发情形
- 细胞解冻后超72小时未进行培养操作
- 使用非指定培养基导致GFP表达丢失
- 反复冻融或不当操作导致细胞损伤
- 未按规范进行荧光标记稳定性监测
