一、细胞基本属性
细胞名称：MN9D小鼠中脑多巴胺能神经元细胞
细胞别称：MN9D；中脑多巴胺能神经元细胞；多巴胺神经元细胞系
种属来源：小鼠（Mus musculus）
品系背景：C57BL/6×C3H杂交品系（胚胎中脑神经元与神经母细胞瘤细胞融合）
组织来源：中脑腹侧被盖区（VTA）与黑质致密部（SNc）原代神经元融合
生长特性：贴壁生长（依赖多聚赖氨酸/层粘连蛋白包被）
细胞形态：双极/多极神经元样形态，具长轴突突起，TH（酪氨酸羟化酶）阳性表达
细胞代数：P5 - P20（推荐代数范围，长期传代可能导致表型衰减）
细胞规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管（含无血清型冻存液）
培养基：
基础培养基：高糖DMEM（含10% FBS + 1%青霉素-链霉素）
维持培养基：DMEM/F12（含B27补充剂 + 20 ng/mL GDNF + 10 ng/mL bFGF）
培养条件：
气相：5% CO₂ + 95%空气
温度：37℃
湿度：95%
包被要求：0.1 mg/mL多聚赖氨酸预包被培养器皿
冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO + 90% FBS），-150℃以下长期保存
倍增时间：~48 - 72小时（依赖生长因子浓度）
应用限制：仅限神经生物学机制研究（如帕金森病模型），不可用于临床治疗或食品实验
二、细胞培养操作指南
收货处理：
冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热维持培养基
培养瓶：酒精消毒后直接转移至CO₂培养箱（避免干燥）
传代标准：细胞融合度达70% - 80%（高密度易导致神经元凋亡）
传代比例：1:2至1:3（推荐接种密度5×10³ cells/cm²）
消化方法：
使用0.05%胰酶-EDTA（含酚红指示剂）或Accutase酶
37℃消化1 - 2分钟，轻柔吹打避免机械损伤
注意事项：
避免气泡产生（神经元对剪切力敏感）
传代后12小时内禁止移动培养器皿
每周更换50%培养基以维持生长因子活性
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：基础培养基 + 20% FBS + 10% DMSO + 1% B27补充剂
细胞密度：冻存浓度：3×10⁵ - 5×10⁵ cells/mL
冻存步骤：
离心收集对数生长期细胞，轻柔重悬于冻存液
梯度降温程序：4℃ 30分钟 → -80℃ 24小时 → 液氮长期存储
复苏验证：
复苏后24小时检测存活率（需≥70%，台盼蓝染色）
功能验证：TH免疫荧光染色（阳性率需≥85%）及多巴胺分泌检测（HPLC法）
四、售后服务承诺
重发标准：
运输温度超限导致细胞失活（需提供物流温度记录）
7日内证实真菌/支原体污染（需提供电镜或PCR证据）
复苏后存活率低于70%（需提供台盼蓝染色影像）
STR分型与数据库记录不符
不予重发情形：
使用不含B27/生长因子的培养基导致细胞死亡
机械刮除法替代酶消化传代
液氮存储设备故障导致反复冻融
未执行每周支原体检测引发的交叉污染
细胞代数超过P25后出现表型异常（如TH表达丢失）
注：MN9D细胞对培养环境高度敏感，建议操作时佩戴无菌手套并避免CO₂培养箱频繁开关。
