一、细胞基本属性
- 细胞名称：NIH/3T3小鼠胚胎成纤维细胞
- 细胞别称：3T3细胞；Swiss albino胚胎成纤维细胞
- 种属来源：小鼠（Mus musculus）
- 年龄性别：14 - 17天胚胎（性别未区分）
- 组织来源：胚胎成纤维组织（经胰酶消化分离）
- 生长特性：贴壁生长（依赖培养基血清成分）
- 细胞形态：成纤维样长梭形，单层贴壁呈放射状排列
- 细胞代数：P3 - P10（推荐使用代数以确保增殖活性）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/T75培养瓶或1mL冻存管（含血清冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%双抗）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：含血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），液氮长期保存
- 倍增时间：约24 - 36小时（与血清浓度及传代密度相关）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或转基因动物制备
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精消毒表面后直接置于CO₂培养箱静置
- 传代标准：细胞融合度达90% - 95%（避免过度融合影响增殖能力）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度2×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰酶 - EDTA溶液（含Ca²⁺/Mg²⁺）
- 37℃消化2 - 3分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
- 注意事项：
- 传代前需血清终止消化并离心去除残留胰酶
- 定期检测支原体污染（推荐每3个月检测一次）
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：含血清冻存液（含20% FBS+10% DMSO）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化离心后细胞重悬于冻存液
- 程序降温：4℃ 30min → - 20℃ 2h → - 80℃过夜 → 液氮储存
- 复苏验证：
- 复苏后48小时观察贴壁率（正常应≥85%）
- 功能验证：细胞增殖检测（CCK - 8法评估生长曲线）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输温度记录异常导致细胞失活（需提供物流温度曲线）
- 到货72小时内证实交叉污染（需提供STR比对报告）
- 复苏后贴壁率低于80%（需提供显微成像证据）
- 不予重发情形：
- 未按推荐传代密度导致接触抑制
- 使用低血清（<5%）培养基导致生长停滞
- 未定期检测支原体引发实验室污染
- 液氮储存中断导致细胞复苏失败
