一、细胞基本属性
- 细胞名称：小鼠胚胎成纤维细胞（丝裂霉素C处理）
- 细胞别称：MEF（Mitomycin C - treated）；饲养层成纤维细胞
- 种属来源：小鼠（Mus musculus）
- 发育阶段：胚胎期（E12.5 - E14.5）
- 组织来源：胚胎中胚层组织（经机械分离与酶解纯化）
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被表面）
- 细胞形态：长梭形或星形，处理后呈扁平伸展状
- 处理特性：经丝裂霉素C处理（终浓度10μg/mL，作用2.5小时），丧失增殖能力但保留代谢活性
- 细胞规格：5×10⁵ cells/T25培养瓶（贴壁状态）或1mL冻存管（含10% DMSO冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS + 1%非必需氨基酸+2mM L -谷氨酰胺）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：程序降温冻存液（含细胞保护剂），液氮长期保存
- 功能验证：成功支持胚胎干细胞克隆形成（作为饲养层）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于活体移植或商业化生产
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基。
- 贴壁细胞瓶：酒精擦拭后直接置于CO₂培养箱，24小时内换液。
- 传代标准：细胞密度达90% - 95%融合（处理前未灭活细胞适用）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度2×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液（含0.1%胶原酶）。
- 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落。
- 注意事项：
- 处理前需确认细胞未接触致瘤性试剂。
- 丝裂霉素C处理后需彻底清洗5次去除残留药物。
- 作为饲养层使用时建议在处理后48小时内铺板。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：基础培养基 + 20% FBS + 10% DMSO
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化后离心收集细胞，轻柔重悬于预冷冻存液。
- 程序降温：4℃平衡30分钟→异丙醇盒 - 80℃过夜→液氮气相长期保存。
- 复苏验证：
- 存活率≥85%（未处理细胞复苏后贴壁率≥90%）
- 功能验证：经γ射线辐照后仍能分泌LIF因子（ELISA检测）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 液氮运输罐真空失效导致细胞活性丧失（需提供测温记录）。
- 到货7天内证实支原体污染（需提供双荧光染色法检测结果）。
- 丝裂霉素C处理批次未通过增殖抑制验证（提供流式细胞术数据）。
- 不予重发情形：
- 未按规范进行丝裂霉素C浓度梯度测试直接使用。
- 将处理后的细胞用于非饲养层用途（如转染实验）。
- 重复冻融导致细胞膜完整性受损。
- 超过建议传代次数（P5代后）引发的功能衰减。
