一、细胞基本属性
细胞名称：小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts）
细胞别称：MEF细胞；胚胎成纤维细胞；原代成纤维细胞
种属来源：小鼠（Mus musculus）
发育阶段：胚胎期（E12.5 - E14.5）
组织来源：胚胎中胚层结缔组织
生长特性：贴壁生长（依赖血清及细胞外基质）
细胞形态：长梭形或纺锤状，单层贴壁呈放射状排列
细胞代数：原代（P0）或低代次（P1 - P5，建议使用P3前代次）
细胞规格：1×10^6 cells/T75培养瓶或1mL冻存管（含含血清冻存液）
培养基：DMEM高糖培养基+10% FBS+1%非必需氨基酸+2mM L - 谷氨酰胺
培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件：含血清冻存液（含10% DMSO及胎牛血清）， - 150℃以下长期保存
增殖能力：有限传代（建议不超过5代）
供应限制：仅供基础研究，不可用于干细胞培养或转基因实验
二、细胞培养操作指南
收货处理：
冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于预热培养基
培养瓶：75%酒精表面消毒后直接置于CO₂培养箱静置4小时
传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每2 - 3天传代一次）
传代比例：1:3至1:5（建议接种密度1×10^4 cells/cm²）
消化方法：
使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液（含Ca²⁺/Mg²⁺）
37℃消化2 - 3分钟，轻拍培养瓶促使细胞脱落
注意事项：
原代细胞对胰酶敏感，需严格控制消化时间
传代后48小时内避免频繁移动培养瓶
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方：基础培养基+20% FBS+10% DMSO
细胞密度：冻存浓度5×10^6 - 1×10^7 cells/mL
冻存步骤：
离心收集细胞后缓慢滴加冻存液混匀
程序降温：4℃平衡30分钟→异丙醇冻存盒 - 80℃过夜→液氮长期储存
复苏验证：
复苏后存活率≥85%（台盼蓝染色法）
功能验证：细胞贴壁率＞90%（接种后24小时观察）
四、售后服务承诺
重发标准：
1. 运输过程中温度记录异常（需提供物流温度监控证明）
2. 到货3日内经PCR检测证实支原体污染
3. 复苏后细胞贴壁率低于80%（需提供接种后24小时显微照片）
不予重发情形：
1. 未按推荐培养基进行培养导致细胞衰老
2. 使用高于P5代次细胞进行实验出现异常
3. 自行改良冻存液配方导致细胞损伤
4. 未进行传代前细胞状态确认直接用于实验
