一、细胞基本属性
细胞名称
MC3T3 - E1小鼠胚胎成骨细胞
细胞别称
成骨细胞前体细胞；小鼠颅顶成骨细胞
种属来源
小鼠（Mus musculus）
年龄性别
胚胎阶段（健康供体，性别信息不适用）
组织来源
颅顶骨组织（Calvaria）
生长特性
贴壁生长（依赖胶原蛋白包被表面）
细胞形态
未分化时呈梭形或多角形，成骨诱导后可见矿化结节
细胞代数
P5 - P15（推荐使用代数以维持成骨分化潜能）
细胞规格
1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含专用无血清冻存液）
培养基
α - MEM基础培养基（含10% FBS+1%双抗+成骨诱导添加剂）
培养条件
气相：5% CO₂+95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件
无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
倍增时间
~24 - 48小时（与培养基成分及分化状态相关）
供应限制
仅限科研用途，不可用于临床或动物实验
二、细胞培养操作指南
收货处理
冻存管：37℃水浴快速解冻，加5mL预热培养基轻柔混匀
培养瓶：75%酒精表面消毒后静置培养箱1小时平衡
传代标准
细胞融合度达80% - 90%（建议每2 - 3天传代一次）
传代比例
1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
消化方法
使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.1%胶原酶）
37℃消化2 - 3分钟，终止后离心去除酶残留
注意事项
避免长时间消化（防止膜表面受体损伤）
成骨诱导阶段需每3天更换含β - 甘油磷酸钠的专用培养基
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方
无血清冻存液（含10% DMSO+胎牛血清替代物）
细胞密度
冻存浓度：1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
冻存步骤
离心收集细胞后轻柔重悬于预冷冻存液
梯度降温程序：4℃ 30min → - 20℃ 2h → - 80℃过夜 → 液氮长期储存
复苏验证
复苏后48小时检测细胞贴壁率（应≥90%）
功能验证：碱性磷酸酶活性检测（P8代细胞应保持成骨分化能力）
四、售后服务承诺
重发标准
1. 运输过程温度记录异常（需提供物流温度监控数据）
2. 7天内证实支原体污染（需提供荧光染色法检测报告）
3. 复苏后活细胞率低于85%（台盼蓝染色法复检）
4. 种属鉴定结果与标注不符（需提供PCR检测报告）
不予重发情形
1. 未按规范进行胶原包被导致贴壁失败
2. 自行修改培养基配方引起分化异常
3. 成骨诱导阶段未定期更换专用培养基
4. 细胞传代超过P15代后出现功能衰退
