一、细胞基本属性
- 细胞名称：MB49+LUC小鼠膀胱癌细胞荧光素酶标记株
- 细胞别称：MB49 - LUC、MB49荧光素酶标记细胞、小鼠膀胱癌细胞 - LUC
- 种属来源：小鼠（Mus musculus）
- 年龄性别：C57BL/6雌性小鼠（供体筛选无特定病原体感染）
- 组织来源：膀胱癌组织
- 生长特性：贴壁生长（依赖细胞外基质成分）
- 细胞形态：上皮样，贴壁后呈多边形或纺锤形
- 细胞代数：P3 - P8（保证荧光素酶表达稳定性与遗传一致性）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS、1%青霉素 - 链霉素、300μg/mL G418筛选维持）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：约24 - 48小时（依赖培养条件与细胞密度）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床诊疗或动物实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入4mL预热完全培养基混匀离心，弃上清后重悬接种。
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置于培养箱2小时，待温度平衡后更换新鲜培养基。
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（无Ca²⁺/Mg²⁺）。
- 37℃消化1 - 2分钟，显微镜下观察细胞边缘收缩后，立即加入含血清培养基终止消化。
- 注意事项：
- 避免消化过度导致细胞膜损伤，影响荧光素酶活性。
- 传代后24小时内更换培养基，去除残余消化酶及死细胞碎片。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及渗透保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
1. 离心收集细胞，重悬于预冷冻存液。
2. 梯度降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存。
- 复苏验证：
- 复苏后24小时台盼蓝染色检测存活率（≥95%为合格）。
- 功能验证：荧光素酶活性检测（使用荧光素底物，P5代细胞RLU值需符合标准范围）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
1. 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供干冰包装状态证明）。
2. 3天内证实支原体或细菌污染（需提供第三方检测报告）。
3. 复苏存活率低于90%（台盼蓝染色法复检确认）。
4. 荧光素酶活性检测未达标准值（需提供原始实验数据）。
- 不予重发情形：
1. 收货后超72小时未进行复苏操作。
2. 使用非推荐培养基或未添加G418筛选导致标记丢失。
3. 反复冻融或不当操作导致细胞损伤。
4. 未按规范进行荧光素酶活性验证或污染检测直接开展实验。
