一、细胞基本属性
细胞名称:K7M2WT(K7M2 - WT)-LUC小鼠骨肉瘤成骨细胞
细胞别称:荧光素酶标记骨肉瘤成骨细胞;K7M2 - LUC骨肉瘤细胞
种属来源:小鼠(Mus musculus)
组织来源:骨肉瘤组织(经荧光素酶基因稳定转染)
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:长梭形或多角形,单层贴壁呈致密排列
细胞代数:P3 - P10(建议使用中低代数维持荧光素酶活性)
细胞规格:1×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:高糖DMEM(含10% FBS+1%双抗+300μg/mL G418筛选剂)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清细胞冻存液(含DMSO及荧光素酶活性保护剂),液氮长期保存
荧光特性:稳定表达萤火虫荧光素酶(Luc2基因),适用于活体成像及体外生物发光检测
供应限制:仅供肿瘤机制研究与药物筛选实验,不可用于人体或临床
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴解冻后,离心去除冻存液,重悬于预热培养基
- 培养瓶:表面消毒后直接置于CO₂培养箱,4小时后更换新鲜培养基
传代标准:细胞密度达80% - 90%融合(建议每2 - 3天传代)
传代比例:1:3至1:4(推荐初始接种密度1×10⁴ cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液
- 37℃消化2 - 3分钟,轻拍培养瓶促使细胞脱落
注意事项:
- 维持G418浓度防止荧光素酶表达丢失
- 避免频繁传代(超过P10代可能降低发光强度)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:专用无血清冻存液(含10%DMSO+荧光素酶稳定剂)
细胞密度:推荐冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
- 消化离心后缓慢滴加冻存液重悬
- 程序降温:4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期储存
复苏验证:
- 复苏后48小时内检测荧光素酶活性(化学发光法RLU值≥1×10⁶)
- 形态学验证:需保持典型成骨细胞钙结节形成能力
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 干冰运输超时导致细胞失活(需提供物流温度记录)
2. 到货72小时内检出支原体污染(需提供检测原始数据)
3. 荧光素酶本底信号低于承诺值(需提供酶标仪检测报告)
4. 细胞STR分型与数据库不匹配
不予重发情形:
1. 未按要求添加筛选抗生素导致基因标记丢失
2. 使用非指定培养体系影响细胞特性
3. 反复冻融超过3次造成功能损伤
4. 实验操作不当导致荧光素酶底物污染
(注:本产品需配合专用荧光素酶检测底物使用,实验前请进行剂量预实验优化信噪比)