一、细胞基本属性
细胞名称
人角膜内皮细胞（Human Corneal Endothelial Cells）
细胞别称
HCorEC；角膜内皮细胞；角膜后弹力层细胞
种属来源
人（Homo sapiens）
年龄性别
健康成人（性别不限，供体筛选无眼部疾病史）
组织来源
角膜后弹力层分离纯化
生长特性
贴壁生长（需胶原蛋白包被培养器皿）
细胞形态
单层紧密镶嵌排列，典型六边形铺路石样结构
细胞代数
P2 - P6（维持细胞分化功能与离子泵活性）
细胞规格
5×10⁴ cells/T25培养瓶 或 0.5mL冻存管（含专用无血清冻存液）
培养基
角膜内皮细胞专用培养基（含1% FBS + 成纤维生长因子 + 胰岛素样生长因子）
培养条件
气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
冻存条件
无蛋白冻存液（含5% DMSO及海藻糖保护剂），液氮气相长期保存
倍增时间
~72 - 96小时（需严格控制细胞密度与传代频率）
供应限制
仅限基础研究使用，禁止临床应用或转售
二、细胞培养操作指南
收货处理
- 冻存管：37℃水浴解冻后，低速离心去除冻存液，重悬于预温培养基
- 培养瓶：表面消毒后直接置于CO₂培养箱，4小时后首次换液
传代标准
细胞融合度达80% - 85%（高密度易诱发内皮 - 间质转化）
传代比例
1:1至1:2（建议接种密度≥3×10³ cells/cm²）
消化方法
- 使用0.02% EDTA - 胰酶混合消化液
- 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项
- 禁止使用高浓度消化酶（防止钠钾泵蛋白降解）
- 换液时沿侧壁缓慢加入，避免冲击单层细胞结构
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方
无动物源冻存液（含5% DMSO + 2%羟乙基淀粉）
细胞密度
冻存浓度：5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤
- 预冷冻存管至4℃，细胞悬液分装后立即密封
- 程序降温仪控制速率：-1℃/min至 - 80℃，24小时内转入液氮
复苏验证
- 复苏后48小时进行Calcein - AM/PI双染活性检测（存活率≥90%）
- 功能验证：Western Blot检测ZO - 1紧密连接蛋白表达
四、售后服务承诺
重发标准
1. 运输温度记录异常导致细胞失活（需提供物流温度监控数据）
2. 到货7天内经qPCR证实真菌/支原体污染
3. 细胞纯度低于95%（通过Pax6免疫荧光鉴定）
4. 线粒体膜电位检测未达标准值
不予重发情形
1. 解冻后未按规程进行贴壁前离心处理
2. 擅自使用胎牛血清替代专用无血清培养基
3. 培养环境中紫外线照射导致DNA损伤
4. 未定期检测培养基渗透压（要求290 - 310 mOsm/kg）
