一、细胞基本属性
- 细胞名称:人淋巴管成纤维细胞(Human Lymphatic Fibroblasts)
- 细胞别称:HLyF;淋巴管基质细胞;淋巴管内皮支持细胞
- 种属来源:人(Homo sapiens)
- 年龄性别:健康成人(性别不限,供体无淋巴系统疾病史)
- 组织来源:淋巴管壁中膜层分离纯化
- 生长特性:贴壁生长(依赖胶原包被培养器皿)
- 细胞形态:长梭形或星形,平行排列呈束状结构
- 细胞代数:P3 - P8(功能活性稳定,无衰老表型)
- 细胞规格:5×10⁴ cells/T25胶原包被培养瓶 或 1mL冻存管(无血清冻存体系)
- 培养基:Fibroblast Growth Medium(含10% FBS + 碱性成纤维细胞生长因子)
- 培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
- 冻存条件:无血清细胞冻存液(含DMSO及海藻糖保护剂),液氮长期保存
- 倍增时间:约60 - 72小时(与细胞密度及传代比例相关)
- 供应限制:仅限于基础研究使用,禁止临床应用或转基因操作
二、细胞培养操作指南
- 收货处理:
- 冻存管:37℃水浴轻柔摇晃解冻,加入5mL预温培养基离心洗涤
- 培养瓶:酒精消毒外表面后直接置于CO₂培养箱,静置4小时再换液
- 传代标准:融合度达80% - 90%(接触抑制明显时需及时传代)
- 传代比例:1:2至1:4(建议接种密度3×10³ cells/cm²)
- 消化方法:使用0.25% Trypsin - EDTA溶液,37℃消化3 - 5分钟,显微镜下观察到细胞边缘卷曲立即终止
- 注意事项:
- 消化终止需加入2倍体积含血清培养基
- 传代后48小时内避免频繁移动培养器皿
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方:无蛋白冻存基液(含10% DMSO + 5%蔗糖)
- 细胞密度:推荐冻存浓度:1×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤:离心后缓慢滴加冻存液重悬细胞,程序降温:4℃平衡30分钟 → 放入冻存盒转移至 - 80℃过夜 → 液氮储存
- 复苏验证:
- 复苏存活率≥85%(台盼蓝染色法)
- 功能检测:胶原分泌量测定(P5代细胞应维持ECM合成能力)
四、售后服务承诺
- 重发标准:
1. 物流温度记录异常导致细胞失活(需提供温度监测曲线)
2. 到货72小时内经PCR证实支原体污染
3. 细胞STR分型与数据库不匹配
4. 原代细胞增殖能力异常(传代3次内未达理论倍增数)
- 不予重发情形:
1. 使用非胶原包被培养器皿导致贴壁失败
2. 自行修改培养基配方影响细胞特性
3. 未按要求进行细胞特性鉴定(如α - SMA免疫荧光验证)
4. 液氮保存期间温度波动导致细胞损伤