一、细胞基本属性
细胞名称:人增生性瘢痕成纤维细胞(Human Hypertrophic Scar Fibroblasts)
细胞别称:HSF;瘢痕成纤维细胞;皮肤瘢痕细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:瘢痕组织供体(18 - 60岁,性别不限,供体筛选无全身性疾病史)
组织来源:手术切除的增生性瘢痕组织(经病理学确认)
生长特性:贴壁生长(依赖胶原基质涂层)
细胞形态:长梭形,融合后呈交叉网状排列
细胞代数:P3 - P8(维持胶原分泌活性与增殖能力)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:成纤维细胞专用培养基(含10% FBS + 表皮生长因子 + 抗坏血酸)
培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含DMSO及细胞保护剂), - 150℃以下长期保存
倍增时间:~48 - 72小时(与瘢痕成熟度及供体年龄相关)
供应限制:仅限科研用途,不可用于临床治疗或药物开发
二、细胞培养操作指南
收货处理:
• 冻存管:37℃水浴快速解冻,加入5mL预热培养基轻柔混匀
• 培养瓶:75%酒精表面消毒后静置培养箱2小时平衡温湿度
传代标准:细胞融合度达80% - 90%(通常每5 - 7天传代一次)
传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度4×10³ cells/cm²)
消化方法:
• 使用0.25% Trypsin - EDTA(含0.02%胶原酶)
• 37℃消化2 - 3分钟,终止时加入含血清培养基
注意事项:
• 避免剧烈吹打(防止细胞外基质过度脱落)
• 传代后48小时内避免换液以保留自分泌因子
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及海藻糖保护剂)
细胞密度:冻存浓度:1×10⁶ - 1.5×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
• 离心收集细胞后轻柔重悬于冻存液
• 梯度降温:4℃ 30min → - 20℃ 2h → - 80℃过夜 → 液氮长期储存
复苏验证:
• 复苏后48小时台盼蓝染色检测存活率(保证≥90%)
• 功能验证:胶原分泌能力检测(P5代细胞ELISA检测I型胶原>5μg/10⁶ cells)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度记录异常导致细胞失活(需提供物流温度监控截图)
2. 7天内证实真菌/细菌污染(需提供测序污染报告)
3. 细胞贴壁率低于80%(复苏72小时后显微图像证明)
4. α - SMA免疫荧光鉴定与描述不符
不予重发情形:
1. 解冻后未及时接种(超过6小时未处理)
2. 自行修改培养基配方导致功能异常
3. 机械刮取法传代造成细胞损伤
4. 未定期检测细胞分化标记物即用于实验
注:所有操作需符合生物安全二级实验室规范,细胞特性可能因个体差异存在批次间波动