一、细胞基本属性
- 细胞名称:人脂肪干细胞(Human Adipose - Derived Stem Cells)
- 细胞别称:ADSC;脂肪间充质干细胞;脂肪源性干细胞
- 种属来源:人(Homo sapiens)
- 年龄性别:健康成人(性别不限,供体筛选无代谢性疾病及脂肪组织异常史)
- 组织来源:脂肪组织(皮下或内脏脂肪)
- 生长特性:贴壁生长(依赖胶原或纤连蛋白包被)
- 细胞形态:长梭形或成纤维细胞样,单层贴壁呈放射状排列
- 细胞代数:P3 - P8(维持多向分化潜能及基因组稳定性)
- 细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管(含无血清冻存液)
- 培养基:间充质干细胞专用培养基(含10% FBS + 成纤维生长因子FGF - 2)
- 培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
- 冻存条件:无血清冻存液(含5% DMSO及细胞保护剂),-150℃以下长期保存
- 倍增时间:~48 - 60小时(与供体年龄及培养密度相关)
- 供应限制:仅限科研用途,不可用于临床治疗或体内移植
二、细胞培养操作指南
- 收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去除冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶:酒精擦拭外表面,静置培养箱4小时再换液
- 传代标准:细胞融合度达80% - 90%(建议每5 - 7天传代一次)
- 传代比例:1:3至1:4(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
- 消化方法:
- 使用0.25% Trypsin - EDTA(含1% BSA缓冲)
- 37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落,立即终止消化
- 注意事项:
- 避免高密度培养导致自发分化
- 传代后48小时内避免频繁观察以降低污染风险
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方:无血清冻存液(含5% DMSO及海藻糖保护剂)
- 细胞密度:冻存浓度:1×10⁶ - 5×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤:
- 消化离心后重悬于冻存液,分装至冻存管
- 程序降温:4℃ 30min → -80℃ 24h → 转入液氮长期保存
- 复苏验证:
- 复苏后存活率≥85%(台盼蓝染色法)
- 分化能力验证:成脂/成骨诱导14天后经油红O/茜素红染色确认
四、售后服务承诺
- 重发标准:
- 运输途中温度异常导致细胞失活(需提供物流温度记录)
- 到货72小时内证实真菌/支原体污染(需提供检测报告)
- 细胞复苏存活率低于85%(需提供台盼蓝染色影像)
- 表面标志物CD73/CD90/CD105阳性率<95%(流式检测报告)
- 不予重发情形:
- 未按规范进行预包被直接接种细胞
- 使用胎牛血清替代无血清冻存液
- 超代次使用(P8代后功能异常)
- 未定期进行核型分析导致遗传变异未被发现