一、细胞基本属性
细胞名称:人胰腺星状细胞(Human Pancreatic Stellate Cells)
细胞别称:HPSC;胰腺星状细胞;胰星状细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:健康成人(性别不限,供体筛选无胰腺疾病史)
组织来源:胰腺组织星状细胞富集区域
生长特性:贴壁生长(需胶原基质包被培养器皿)
细胞形态:静息态呈扁平星状,活化后伸展为纺锤形或多突状
细胞代数:P2 - P6(推荐使用代数以维持表型稳定性)
细胞规格:5×10⁵ cells/T25培养瓶 或 1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:星状细胞专用培养基(含2% FBS + 生长因子补充剂)
培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
倍增时间:约72 - 96小时(受激活状态影响显著)
供应限制:仅限基础研究使用,不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶:表面消毒后静置培养箱4小时再观察贴壁情况
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每周传代1次)
传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²)
消化方法:
- 采用0.25% Trypsin - EDTA(含0.05%胶原酶)
- 37℃消化3 - 5分钟,轻拍培养瓶促使细胞脱落
注意事项:
- 避免反复离心(易导致细胞自激活)
- 传代后48小时内避免换液以保持旁分泌因子平衡
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及抗氧化剂)
细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
- 消化后细胞悬液离心,缓慢滴加冻存液混匀
- 程序降温:4℃ 30分钟 → -80℃ 过夜 → 转入液氮气相层
复苏验证:
- 复苏后存活率≥85%(台盼蓝染色法)
- 功能验证:α - SMA免疫荧光检测(P3代细胞静息态标志物阳性率>90%)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输温度异常导致细胞失活(需提供物流温度记录)
2. 5日内证实微生物污染(需提供第三方检测报告)
3. 复苏存活率低于80%(按规范操作验证)
4. 细胞特异性标志物表达不达标
不予重发情形:
1. 未按推荐条件进行原代激活实验
2. 使用非配套培养基导致细胞表型改变
3. 超时培养导致自发活化(传代超过P8)
4. 未执行静息态维持培养方案