一、细胞基本属性
细胞名称:人食管平滑肌细胞(Human Esophageal Smooth Muscle Cells)
细胞别称:HESMC;食管平滑肌细胞;食管肌层细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:健康成人(性别不限,供体筛查无食管疾病史)
组织来源:食管组织肌层分离
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:长梭形或纺锤状,平行排列生长
细胞代数:P3 - P8(确保收缩功能与表型稳定性)
细胞规格:1×10⁵ cells/T25 网站系统 V3.2.5
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培养瓶 或 1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:Smooth Muscle Cell Medium(含5% FBS + 平滑肌特异性生长因子)
培养条件:气相:5% CO₂ + 95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),-150℃以下长期保存
倍增时间:~72 - 96小时(与细胞密度及培养基活性相关)
供应限制:仅供科学研究,不得用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
• 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
• 培养瓶:酒精消毒表面后静置培养箱4小时平衡
传代标准:细胞密度达80% - 90%(建议每5 - 7天传代一次)
传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法:
• 使用0.25%胰酶 - 胶原酶混合消化液
• 37℃消化3 - 5分钟,显微镜下观察细胞边缘卷曲后终止
注意事项:
• 避免机械刮取损伤细胞骨架
• 传代后48小时内避免换液以维持细胞黏附
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及胎牛血清替代物)
细胞密度:冻存浓度:5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
• 离心收集细胞后轻柔重悬于冻存液
• 梯度降温:4℃ 30分钟 → -20℃ 1小时 → -80℃过夜 → 液氮储存
复苏验证:
• 复苏后48小时检测细胞存活率(≥90%)
• 功能验证:钙离子刺激收缩实验(P5代细胞应保持收缩响应性)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度异常导致细胞死亡(需提供温度记录凭证)
2. 7日内证实支原体污染(需提供第三方检测报告)
3. 细胞贴壁率低于80%(接种24小时后评估)
4. α - SMA免疫荧光鉴定阴性
不予重发情形:
1. 未使用胶原包被培养器皿导致细胞脱落
2. 自行修改培养基配方引发表型改变
3. 消化时间超限导致细胞碎片增多
4. 未按规范进行细胞功能验证