一、细胞基本属性
- 细胞名称：小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts）
- 细胞别称：MEF；胚胎成纤维细胞；原代成纤维细胞
- 种属来源：小鼠（Mus musculus）
- 胚胎阶段：E13.5（健康胚胎，无遗传缺陷）
- 组织来源：胚胎组织（分离自胚胎中胚层）
- 生长特性：贴壁生长（依赖细胞外基质及生长因子）
- 细胞形态：长梭形或纺锤形，贴壁后呈典型成纤维样单层
- 细胞代数：P3 - P5（原代细胞传代次数有限，建议早期使用）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS + 1%非必需氨基酸+2mM L -谷氨酰胺）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
- 倍增时间：~24 - 48小时（依赖血清批次及细胞初始密度）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或转基因动物制备
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加5mL预热培养基混匀离心（200g，5分钟），重悬后接种
- 培养瓶：75%酒精擦拭外壁，静置培养箱1小时平衡后更换新鲜培养基
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（贴壁致密但未过度拥挤）
- 传代比例：1:3至1:4（建议接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液（含Ca²⁺/Mg²⁺）
- 37℃消化2 - 3分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落，立即加入含血清培养基终止
- 注意事项：
- 避免长时间消化（导致细胞团块及活性下降）
- 传代后12小时内避免频繁移动培养瓶，确保贴壁稳定性
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：基础培养基+20% FBS + 10% DMSO
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心后弃上清，缓慢滴加预冷冻存液重悬
- 梯度降温：4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃过夜→液氮长期保存
- 复苏验证：
- 复苏后存活率≥90%（台盼蓝染色法）
- 功能验证：贴壁效率检测（24小时内贴壁率＞80%）及增殖能力评估
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度记录异常导致细胞失活（需提供物流温度监控记录）
- 到货48小时内证实微生物污染（需提供污染检测结果）
- 细胞复苏后存活率低于85%（需提供台盼蓝染色图像）
- 细胞种属鉴定与承诺不符（需提供STR比对报告）
- 不予重发情形：
- 解冻后未及时接种（超过6小时未处理）
- 使用含抗生素或非推荐培养基导致细胞状态异常
- 未按规范进行细胞传代（如机械刮取代替消化）
- 未定期进行支原体检测引发交叉污染
