一、细胞基本属性
细胞名称:小鼠结膜成纤维细胞(Mouse Conjunctival Fibroblasts)
细胞别称:结膜成纤维细胞;MCF
种属来源:小鼠(Mus musculus)
年龄性别:健康成年小鼠(性别不限,无眼部疾病史)
组织来源:结膜组织经胶原酶消化分离
生长特性:贴壁生长(依赖细胞外基质黏附)
细胞形态:长梭形或纺锤状,融合后呈网状排列
细胞代数:P3 - P10(推荐使用P5 - P8代以保证功能稳定性)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:成纤维细胞专用培养基(含10% FBS+双抗+生长因子)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含8% DMSO及细胞保护剂),液氮长期保存
倍增时间:约24 - 48小时(与传代密度及血清批次相关)
供应限制:仅用于基础研究,不可用于临床或活体实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速复苏,离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶:酒精消毒表面后直接置于CO₂培养箱
传代标准:细胞融合度达80%-90%(建议每2 - 3天传代)
传代比例:1:3至1:5(推荐初始接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰蛋白酶 - EDTA溶液
- 37℃消化1 - 3分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项:
- 避免消化过度导致细胞膜损伤
- 首次传代建议保留原代培养基50%比例混合
- 定期检测支原体污染(每3代建议检测一次)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含8% DMSO+20% FBS)
细胞密度:冻存浓度1×10⁶ - 1.5×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
- 离心收集细胞后缓慢加入预冷冻存液
- 程序降温:4℃平衡30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期保存
复苏验证:
- 复苏后存活率≥90%(台盼蓝染色法)
- 功能验证:胶原分泌检测(P5代细胞应保持Ⅰ型胶原合成能力)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程温度异常(需提供物流温度记录证明)
2. 到货72小时内证实微生物污染(需提供检测报告)
3. 复苏后存活率低于85%
4. 细胞种属鉴定不符(STR检测结果异常)
不予重发情形:
1. 客户未按推荐培养基及传代流程操作
2. 细胞冻存后未及时转移至液氮导致活性丧失
3. 自行修改培养条件导致细胞分化或功能异常
4. 未按生物安全规范操作引发交叉污染