一、细胞基本属性
- 细胞名称：小鼠脑微血管内皮细胞（Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells）
- 细胞别称：MBMEC；脑微血管内皮细胞；脑血管内皮细胞
- 种属来源：小鼠（Mus musculus）
- 年龄性别：健康成年小鼠（性别不限，供体筛选无神经系统疾病史）
- 组织来源：脑组织微血管段
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白或纤连蛋白包被基质）
- 细胞形态：单层铺展呈多角形，接触抑制后形成紧密连接
- 细胞代数：P3 - P8（确保功能稳定性与遗传背景一致性）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：内皮细胞专用培养基（含2% FBS、肝素及内皮生长因子补充剂）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 倍增时间：约48 - 72小时（受培养密度和基质包被影响）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或动物活体实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入预热的培养基轻柔混匀离心后接种。
- 培养瓶：酒精擦拭表面后静置于培养箱2小时，待温度平衡后换液。
- 传代标准：融合度达80% - 90%时传代（通常每3 - 4天一次）。
- 传代比例：推荐1:2至1:3（初始接种密度建议4×10³ cells/cm²）。
- 消化方法
- 使用0.25%胰酶 - EDTA（含低浓度胶原酶）。
- 37℃消化1 - 2分钟，显微镜下观察细胞边缘卷曲后立即终止。
- 注意事项
- 避免消化过度导致紧密连接蛋白损伤。
- 传代后24小时内更换新鲜培养基以去除残留酶。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及渗透保护剂）。
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL。
- 冻存步骤
- 细胞离心后重悬于冻存液，分装至冻存管。
- 梯度降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存。
- 复苏验证
- 复苏后24小时台盼蓝染色检测存活率（≥90%为合格）。
- 功能验证：跨膜电阻（TEER）检测P5代细胞屏障功能完整性。
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供冻存管状态证明）。
- 72小时内证实细菌/支原体污染（需提供检测报告）。
- 复苏后存活率低于90%（按台盼蓝染色结果）。
- 细胞种属鉴定与描述不符。
- 不予重发情形
- 客户未按推荐条件保存或延迟复苏超过72小时。
- 使用非指定培养基或基质导致细胞状态异常。
- 不当操作（如反复冻融）引发的细胞损伤。
- 未进行污染检测直接用于实验导致争议。
