一、细胞基本属性
细胞名称:小鼠骨髓巨噬细胞(Bone Marrow - Derived Macrophages)
细胞别称:BMDM;骨髓源性巨噬细胞;原代巨噬细胞
种属来源:小鼠(Mus musculus)
年龄性别:健康成年鼠(性别可选配,SPF级动物房饲养)
组织来源:股骨与胫骨骨髓腔单核细胞经分化诱导
生长特性:贴壁生长(培养初期悬浮,分化后贴壁)
细胞形态:活化前呈圆形,极化后伸展为阿米巴样伪足
细胞代数:原代培养(P0)直接使用,建议不传代
细胞规格:5×10⁵ cells/冻存管(含无血清冻存液)
培养基:RPMI 1640+10% FBS+20ng/mL M - CSF
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:程序降温冻存液(含DMSO及血清替代物),液氮长期保存
极化能力:经LPS/IFN - γ或IL - 4/IL - 13刺激可分别极化为M1/M2表型
供应限制:仅供基础研究,不可用于药物筛选或体内移植
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴解冻后接种预铺明胶的培养皿
- 培养瓶:保持原有培养基静置培养箱4小时
分化诱导:
- 骨髓单核细胞经7天M - CSF诱导分化为成熟巨噬细胞
- 每3天半量换液维持细胞因子浓度
传代建议:
- 原代细胞不建议传代,特殊需求可用细胞刮轻柔收集
注意事项:
- 避免频繁观察扰动未贴壁前体细胞
- 分化期间保持培养环境稳定,严禁抗生素使用
三、细胞冻存操作规范
冻存时机:
- 骨髓单核细胞冻存:分离后24小时内
- 成熟巨噬细胞冻存:分化完成后即刻进行
冻存密度:
- 单核细胞:5×10⁶ cells/mL
- 成熟细胞:1×10⁶ cells/mL
冻存程序:
- 4℃预冷冻存液重悬细胞
- 程序降温仪梯度冷冻:-1℃/min至 - 80℃
功能验证:
- 复苏后CD11b/F4/80双阳性率≥90%
- 吞噬功能检测:荧光微球吞噬率>85%
四、售后服务承诺
质控项目:
- 无菌检测:细菌/真菌/支原体三重阴性
- 内毒素水平:<0.1 EU/mL
- 病原检测:MAP检测阴性
重发条款:
1. 活率<80%(台盼蓝法复检)
2. 细胞表面标记阳性率<85%
3. 分化后吞噬功能未达标
4. 液氮运输罐失压导致细胞损坏
免责情形:
1. 解冻后未及时接种超过6小时
2. 未使用指定浓度M - CSF维持培养
3. 分化期间擅自添加其他细胞因子
4. 未按规程进行极化前静息培养
注:本产品需配合专用巨噬细胞培养基使用,详细实验方案可索取技术文档。