一、细胞基本属性
细胞名称:小鼠骨髓间充质干细胞(Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells)
细胞别称:mBM - MSC;骨髓基质干细胞;骨髓多能干细胞
种属来源:小鼠(Mus musculus)
年龄性别:6 - 8周健康成年鼠(性别可选,SPF级动物来源)
组织来源:股骨与胫骨骨髓腔
生长特性:贴壁生长(需包被明胶基质)
细胞形态:长梭形或纺锤状,增殖期呈漩涡状排列
细胞代数:P3 - P10(保持多向分化潜能)
细胞规格:5×10⁵ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(专用无血清冻存体系)
培养基:α - MEM基础培养基(含10% FBS+1% GlutaMAX+1%NEAA+10ng/mL bFGF)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:程序降温冻存液(含DMSO及血清替代物),液氮气相长期保存
倍增时间:约24 - 36小时(与细胞代次及接种密度相关)
供应限制:限于基础研究使用,不可用于临床治疗或转基因生物构建
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴震荡解冻,立即转移至15mL离心管稀释
- 培养瓶:表面消毒后静置4小时再换液
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每2 - 3天传代)
传代比例:1:3至1:4(推荐初始密度1×10⁴ cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰酶 - 0.02%EDTA溶液
- 37℃消化2 - 3分钟,显微镜下观察细胞边缘卷曲立即终止
注意事项:
- 首次传代前需完成48小时适应期
- 换液时保留1/3原培养基维持细胞稳态
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含5% DMSO+30% FBS+65%基础培养基)
细胞密度:推荐冻存浓度:2×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
- 消化后1000rpm离心5分钟收集细胞
- 分装冻存管后置于程序降温盒(- 1℃/min)
- 梯度保存:4℃30min → - 80℃过夜 → 液氮储存
复苏验证:
- 台盼蓝染色存活率≥85%
- 分化能力验证:成骨/成脂诱导培养21天染色鉴定
四、售后服务承诺
重发标准:
- 1.运输过程温度记录异常(需提供物流温度曲线)
- 2.收到后72小时内证实微生物污染
- 3.流式检测CD29/CD44阳性率<90%
- 4.核型分析显示异常染色体
不予重发情形:
- 1.解冻后未及时换液导致细胞老化
- 2.擅自使用高浓度抗生素处理
- 3.未按推荐密度进行传代培养
- 4.超过说明书规定代次继续扩增